[发明专利]一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法有效
| 申请号： | 201710786745.9 | 申请日： | 2017-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN107418930B | 公开（公告）日： | 2020-05-12 |
| 发明（设计）人： | 李新峰 | 申请（专利权）人： | 上海莱馥医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 201114 上海市闵*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 纯化 扩增 骨髓 间充质 干细胞 制备 方法 | ||
1.一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，包括：
(1)采用基于抗体的负向分选法：在骨髓中加入抗体混合物使非目标细胞和红细胞交联，经密度梯度离心，从血浆层下层收集间充质干细胞；
(2)采用无血清培养基扩增间充质干细胞，其中，无血清培养基添加以下组分：10μg/ml重组人胰岛素、20ng/ml重组人表皮生长因子、20ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子、10ng/ml重组人转化生长因子-β、20ng/ml重组人血小板衍生生长因子-BB、0.5μg/ml氢化可的松、50μg/ml维生素C、2mM还原型谷胱甘肽、5μg/ml重组人转铁蛋白、1μg/ml乙醇胺、2mML-谷氨酰胺、50μg/ml辅酶A、5U/ml重组人凝血酶、10μg/ml庆大霉素和5ng/ml亚硒酸钠。
2.根据权利要求1所述的一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于：在所述步骤(2)扩增间充质干细胞之前用1～10μg/mL的重组人纤连蛋白包被培养瓶。
3.根据权利要求2所述的一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于：所述培养瓶在4℃的条件下包被过夜。
4.根据权利要求1所述的一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的无血清培养基为DMEM-F12。
5.根据权利要求1所述的一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于：在所述步骤(2)扩增间充质干细胞之后细胞传代过程中使用TrypLETM消化细胞。
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