[发明专利]一种酮还原酶及其在制备（S）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇上的应用

说明书

本发明涉及酶法制备手性醇，属于基因工程技术用于制备医药中间体领域。一种酮还原酶及其在制备（S）‑2‑氯‑1‑（3,4‑二氟苯基）乙醇上的应用，提供一种与现有技术酮还原酶来源不同的酮还原酶，该酮还原酶能够转化的底物2‑氯‑1‑(3,4‑二氟苯基)乙酮浓度达到350g/L以上，并且产物（S）‑2‑氯‑1‑（3,4‑二氟苯基）乙醇的ee值能够达到99%以上，同时底物转化率在99%以上。本技术方案所提供的新来源的酮还原酶解决了酶催化制备（S）‑2‑氯‑1‑（3,4‑二氟苯基）乙醇在工业应用上底物浓度不高的问题，并提升了高浓度（S）‑2‑氯‑1‑（3,4‑二氟苯基）乙醇的转化率、产物的ee值。

技术领域

本发明涉及一种生物酶，尤其涉及一种酮还原酶及其在制备（S）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇上的应用。

背景技术

替格瑞洛是一种血小板聚集抑制剂，其临床疗效和安全性已得到血小板抑制和患者后果结局研究（PLATO研究）及其多项亚组研究的验证和支持。PLATO研究也显示替格瑞洛的疗效明显优于氯吡格雷，所以被国内外多个指南列于一线推荐。

替格瑞洛的合成路线如式I：

其中，式II所示的化合物作为制备替格瑞洛的关键中间体，因 其具备独特的手性中心，其制备方法的改进，一直是替格瑞洛中间体 合成工艺领域的重要工作。

目前手性分子式II主要通过式III所示的（S）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇分子是通过多步反应得到（见专利文件WO 2008018822、WO 2008018823及Singh A K ；Rao M N;Simpson J H; et al，Org. Process Res . Dev . 2002, 6, 618-620. 及Zhang H ; Liu; zhang L .Y; et al .Bioorg . Med. Chem. Lett., 2012, 22, 3598-3602），因此式III所示（S）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇分子的高效率、高手性选择性的制备是目前替格瑞洛原料药制备的关键步骤。

式III

现有技术中式III及后续中间体的制备工艺如下：

（1）专利CN 103408399：

式IV

该专利采用(S)-CBS-Me 或者(+)-DIP-Cl做还原剂，制备手性分子（S）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇（式III），该方法能耗高，污染严重。并且手性还原剂成本较高，不利于降低工艺成本。且反应收率较低，手性选择性不好。

（2）专利CN 104744266A

该专利所提供的制备方法中，采用与式IV相似的合成方案制备（S）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇（式III）。制备过程中采用硼氢化钠作为还原剂，使得反应不具备手性选择性，原子经济利用率不超过50%。并且硼氢化钠作为活泼金属还原剂在使用过程危险系数较高，不利于工业化。

（3）专利CN 102924457、公布号201410139006.7

该专利亦采用与式IV相似的合成方案制备（S）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇（式III），制备过程中仍采用硼烷类还原剂，无法解决反应手性选择性低、环境污染严重和危险系数较高的问题。

（4）专利CN105969757A、专利CN 105671099 A、CN 106047828以及文献ApplMicrobiol Biotechnol DOI 10.1007/s00253-016-7947-0