[发明专利]生物芯片和特异性切割位点DNA序列检测汞离子的方法

权利要求书

1.生物芯片和特异性切割位点DNA序列检测汞离子的方法，其特征在于按照以下方法进行：

(1)设计：按检测原理设计含有一个和两个硫代磷酸酯(PS)RNA修饰切割位点的DNA序列，送去生物公司合成；将获得的DNA序列溶于超纯水中，终浓度为50nM；

其中一个切割PS位点为：5’GTCACGAGTCAC TAT/rA/*G-FAM 3’；

两个切割PS位点为：5’GTCACGAGTCAC TAT/rA/*G/rA/*G-FAM 3’；

(2)制作芯片：用浓硫酸和双氧水以体积7:3的比例浸泡玻片2小时以上以去掉玻片上的杂质并使玻片材料的羟基(-OH)暴露便于和传感器中氧化石墨烯(GO)中的羧基结合，使传感器在玻片上稳定存在；之后用清水洗涤多次，晾干或风干，在测量时将橡胶放置在处理后的玻片上，按一定力度按压，以防后期加入的待测物泄露；

(3)淬灭：加入2mg/ml的GO，使其在一个切割位点反应体系中的终浓度为12μg/ml，在两个切割位点反应体系中的终浓度为10μg/ml；加入GO后常温下反应20分钟，测量此时的荧光强度F₀；

(4)检测:按梯度加入不同浓度的Hg²⁺，常温下反应20分钟；之后通过生物芯片观察其荧光强度F，与淬灭后的荧光数值F₀进行比较，按照F/F₀-1公式查看荧光回复率，加入的Hg²⁺浓度与荧光回复率呈一定的正比关系；

(5)对比：将一个切割位点的荧光回复率与两个的进行对比，发现两个切割位点的回复效率高于一个切割位点的，说明增加切割位点会提高检测的灵敏度；

(6)实际检测：由于废水中Hg²⁺的含量未知，所以先在废水中加入DNA传感器，之后再向废水中加入所知浓度的Hg²⁺，而该已知浓度的Hg²⁺所引起的荧光强度变化值F₁可直接从灵敏性图中得知。