[发明专利]薄壳山核桃品种Nacono的特征序列、标记引物及鉴定方法

说明书

本发明涉及一对特异性高的薄壳山核桃品种Nacono的特征序列，分子特异性标记引物，以及一种能对薄壳山核桃品种Nacono进行快速鉴定的方法。所述分子特异性标记引物序列如下：上游引物：5′‑GTCACTTCCCTTTCTCGGCA‑3′；下游引物：5′‑CCCCGGGTGCAGGTATAAAA‑3′。本发明分子特异性标记引物可对薄壳山核桃品种Nacono进行快速的早期鉴别，方法简单、快捷、准确，是表观特征辨别薄壳山核桃品种所不能替代的分子手段。

(一)技术领域

本发明涉及薄壳山核桃品种Nacono的特征序列、分子特异性标记引物以及利用该分子特异性标记引物对薄壳山核桃品种Nacono进行快速鉴定的方法。

(二)背景技术

薄壳山核桃(Carya(Wangenh.)K.Koch)是胡桃科山核桃属中最有经济价值的树种。薄壳山核桃是典型的异交植物，现有生产实践发现，薄壳山核桃的品种配置是影响其产量主要因素之一。美国是薄壳山核桃的原产地之一，也是其中心产区，多年来，其已选育命名的栽培品种约1000个。我国引种薄壳山核桃已有100多年历史,目前生产上常用的品种也有几十个，多年的生产实践已证明我国广大亚热带地区是薄壳山核桃的适生区。

但是，现有我国薄壳山核桃产区面临的主要问题是产量低下和不稳定，造成这一现象原因有多个方面，其中之一就是现有引进的品种尚缺乏明确的亲缘关系分析，再加上一些杂交后代定名的混乱，导致难以进行有效的亲本选择和合理配置，不便于品种鉴定、推广、交流及新品种的培育，因此着力从分子水平上开发出这些品种稳定、特异的DNA指纹标记才是实现薄壳山核桃品种准确快速鉴定的科学途径。

国内外已报导基于SSR分子标记的薄壳山核桃品种鉴定和亲缘关系分析，但存在检测较为繁琐，结果不稳定的情况。

(三)发明内容

本发明目的是提供薄壳山核桃品种Nacono的特征序列、分子特异性标记引物以及利用该分子特异性标记引物对薄壳山核桃品种Nacono进行快速鉴定的方法。

本发明采用的技术方案是：

薄壳山核桃品种Nacono的特征序列，其序列如下：5’-AATTCCTCCCAGCATCTTCCGACCGGTTGCCTATCTCATCCTGCATTGTCGTCTACACCTTTCTAGTCACTTCCCTTTCTCGGCATTTTTCTATGCTAGGTCTAGCTACTGGGTGGACAGTCGGGCGAAGCCTCTGATGCTTAAGTTAGTTAGGAGAAAAGGAATTTTTCTCAGAGTTTTAGTTGAGGATTGTTCGAACCACCTACTCGGCGCTCGAAGGGCTGTTTTTATACCTGCACCCGGGGTC-3’(SEQ ID No.1)

本发明还涉及薄壳山核桃品种Nacono的分子特异性标记引物，所述引物序列为：

上游引物：5′-GTCACTTCCCTTTCTCGGCA-3′；

下游引物：5′-CCCCGGGTGCAGGTATAAAA-3′。

该引物对是采用PCR技术，从常见的24个品种中筛选形状差异较大的品种进行简化基因的测序和比较分析，经过大量筛选试验获得薄壳山核桃品种Nacono的特异性DNA片段(SEQ ID No.1)之后，将该片段克隆测序，针对序列相差较大的基因片段设计了1000多对引物，在24个样品中进行筛选和验证，经过初筛和三次以上重复性取样的复筛，最终获得的分子特异性标记引物，以该特异性引物对薄壳山核桃品种进行PCR扩增，仅Nacono可获得180bp大小的特异性片段(SEQ ID No.2)，其他薄壳山核桃品种均不能获得特异性片段。需要说明的是，本发明分子特异性标记引物仅限于薄壳山核桃品种的鉴定，即待测样品仅限于薄壳山核桃。