[发明专利]一种大规模制备单链DNA的方法

说明书

本发明提供了一种适用于实验室大规模平行制备单链DNA的方法。具体来讲，所述方法包括以下步骤：1)合成可重复生产单链DNA的模板，其中，合成时在所述模板的5’端和3’端分别为启动子序列和一段通用接头序列；2)模板的纯化；3)对步骤2)纯化的模板进行体外转录反应合成RNA；4)以步骤3)中得到的RNA为模板进行逆转录反应合成单链DNA，其中逆转录反应的通用反转录引物为步骤1)所述通用接头序列的互补序列，并且所述通用反转录引物的dTTP核酸被dUTP核酸取代；以及5)使用UDG酶对步骤4)中逆转录反应合成的单链DNA末端带有的通用反转录引物序列进行消化，以对其纯化。

技术领域

本发明属于分子生物学领域。更具体地，本发明涉及利用体外转录、逆转录等技术提供了一种适用于实验室大规模平行制备单链DNA的方法。

背景技术

单链DNA是生命科学等领域研究的一种基本工具，近期在生物医药研究和发展中均取得了一些重大突破。在生物医疗领域，反义单链DNA已经被开发为基因靶向治疗的药物，用于抗病毒、抗肿瘤和治疗遗传性疾病；此外，当前的基因和分子生物研究开发领域取得的诸多进步，如生物基因组快速扫描技术、二代测序技术，必须依靠大规模平行制备的单链DNA，表I是单链DNA的各种应用的列表：

表I单链DNA的应用

单链DNA类型	应用
引物	DNA测序、PCR
探针	克隆杂交、诊断杂交
基因组	合成基因组
药物	反义疗法
生理研究	核磁共振、X射线晶体分析法

目前，单链DNA主要采用化学合成的方法，分为固相合成法和液相合成法，固相合成法通常使用亚磷酰胺缩合反应方式，液相合成法通常使用磷酸三酯缩合反应方式或者氢膦酸酯缩合反应方式，但其均存在产物纯度低，而纯化十分困难，且合成的目标序列出错率极高，大规模合成单链DNA的成本十分昂贵等问题，大大限制了寡核酸的研究和应用。目前虽然已开发芯片技术为大规模平行合成单链DNA提供了一种相对简单便捷的方法，但是，大多受到合成单链DNA种类或实验条件等方面的限制而无法推广成为一种实验室常规方法。为克服以上技术问题，本发明在传统化学合成单链DNA的方法上进行改进和扩展，利用体外转录、逆转录等技术提供了一种适用于实验室大规模平行制备单链DNA的方法。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于提供一种适用于实验室大规模平行制备单链DNA的方法，其克服了传统化学法合成单链DNA产物纯度低、产量低、成本高、平行性差的缺点。

技术方案