[发明专利]安白芍PCR鉴定试剂盒及鉴定方法

说明书

本发明公开了一种安白芍PCR鉴定试剂盒及鉴定方法，所述试剂盒中的特异性引物为ABS1和ABS2：ABS1：5'‑CGATGAGCTAAATACGCACC‑3'，ABS2：5'‑ACCGAGCACCCAGAGCAAT‑3'；本发明提供了一种快速、准确鉴定安白芍的方法，可以广泛应用于安白芍中药选种育种、种植、采收储存、销售、临床应用各环节的品种鉴定，在鉴别中药真伪，打击伪品，加强中药质量监管，促进中药现代化发展方面具有重大意义。

(一)技术领域

本发明涉及一种DNA分子鉴定方法，特别涉及中药安白芍PCR鉴定试剂盒、特异性引物、模板及鉴定方法。

(二)背景技术

安白芍(Paeonia lactiflora Pall.)主产于安徽省亳州市，是安徽道地药材以及国家地理标志性产品，以块根入药，主要含有芍药苷、苯甲酰芍药苷及白芍苷等化学物质等有效成分，具有止痛、抗炎、保肝以及多途径抑制自身免疫反应的效用，可用于肝病和心血管疾病的治疗。白芍主产区目前种质资源混乱，大部分都是采用无性繁殖的方式进行白芍的种植，从而导致白芍品种退化，如抗病能力减退，块根性状改变等。白芍种质资源的混乱和退化导致了白芍药用价值和品质的下降。除了安白芍外，白芍主要品种包括浙白芍和川白芍。我国白芍种类植物资源丰富，白芍品种繁多，产地不一，各品种间的药效和价格差别较大，对白芍主流产品安白芍进行鉴定具有重要意义。安白芍与其他白芍品种的外观和性状相似，利用常规的中药鉴定方法较难进行鉴别。利用DNA分子鉴定方法能够解决安白芍鉴别困难的问题，这种基于DNA序列的鉴定方法能够从基因水平上进行品种的甄别，具有准确、高效、重复性好的诸多优点，鉴定的结果不受样品产地、生长环境和来源的影响。

本发明提供的PCR检测法就是一种安白芍的DNA分子鉴定方法，能够准确鉴定安白芍。目前已有的对安白芍做出准确鉴定的方法均为采用传统的中药鉴定手段，利用PCR检测法对安白芍进行鉴定尚未见报道。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种能够准确鉴定中药安白芍的PCR鉴定试剂盒和检测方法，包括PCR检测法关键试剂PCR引物、模板和PCR检测法的检测步骤。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种安白芍PCR鉴定试剂盒，所述试剂盒中的特异性引物为ABS1和ABS2：

ABS1：5'-CGATGAGCTAAATACGCACC-3'，

ABS2：5'-ACCGAGCACCCAGAGCAAT-3'。

进一步，所述的安白芍PCR鉴定试剂盒的组成为：

本发明还涉及一种利用所述安白芍PCR鉴定试剂盒对安白芍进行鉴定的方法，所述方法为：

(1)模板DNA的提取和质量鉴定：采用常规提取法提取供试品DNA作为PCR的模板；以电泳法检测模板DNA的质量(检测方法同步骤(3))，条带清晰无弥散的，即为符合PCR反应的模板DNA；

(2)PCR鉴定：利用安白芍PCR鉴定试剂盒中的特异性引物ABS1和ABS2，进行PCR扩增：

PCR反应溶液：

将PCR反应溶液放入PCR自动扩增仪器中进行PCR扩增反应，反应程序设置为：94℃预变性3min，94℃变性15s，60～65℃复性30s，72℃延伸1min，35个循环，最后72℃延伸7min；

(3)PCR产物进行电泳检测：取出PCR扩增产物(即扩增反应后的反应液)5μL与加样缓冲液1μL混合，用1.2％琼脂糖凝胶电泳(含0.5％溴化乙锭)检测扩增结果，在1027bp处出现扩增条带的为安白芍，在1027bp处不出现扩增条带的不是安白芍。