[发明专利]草鱼FSRP-3在培养基中的应用以及草鱼肌卫星细胞专用培养基

说明书

本发明提供了一种草鱼FSRP‑3在培养基中的应用，还相应提供一种添加草鱼FSRP‑3的草鱼肌卫星细胞专用培养基。本发明的草鱼肌卫星细胞专用培养基，包括基础培养基和添加物，其中添加物包括：草鱼FSRP‑3、草鱼源血清提取物、丙酮酸钠、谷氨酸和维生素E。本发明的草鱼肌卫星细胞专用培养基，能使草鱼肌肉卫星细胞旺盛生长、节省细胞培养周期，具有高效、稳定等特点，具有广阔的市场前景。

技术领域

本发明属于动物细胞培养技术领域，尤其涉及一种草鱼肌卫星细胞的专用培养基。

背景技术

肌肉是具有多向分化潜能的成体干细胞储存库。肌肉中至少存在两种干细胞：肌卫星细胞 (muscle satellite cells，MSC)和肌源干细胞(muscle derived stern cells，MDSC)，由于肌卫星细胞占了绝大部分，因此肌肉干细胞主要指肌卫星细胞。肌卫星细胞只存在于骨骼肌内，而心肌和平滑肌内没有肌卫星细胞。高等脊椎动物出生后其肌纤维数目不会增加，主要依靠肌纤维增长增粗来维持身体生长，只有肌肉受损伤等因素刺激时肌卫星细胞才被激活、分化和自我更新，但鱼类胚后发育过程中肌纤维不仅能增长增粗，而且在幼体时期肌纤维增殖即数量增加能力很强。鱼类幼体增殖的肌纤维来源于成熟肌纤维周围肌卫星细胞的不断激活、分化和自我更新。因此，鱼类是研究内源因素对肌卫星细胞的激活、分化和自我更新调控的理想研究模型。

2002年Stoiber利用电子显微镜在硬骨鱼类的骨骼肌中首次观察到卫星样细胞，2010年后有关鱼类肌卫星细胞分离与培养已有一些报道。由于鱼类种类繁多，每种鱼肌肉组织都有其自身特点，已报道培养基多为海水鱼适宜培养基，淡水鱼特别是草鱼相关培养基未见报道，采用已报道相关培养基培养的草鱼肌肉卫星细胞生长速度、细胞密度和细胞活性都未达到实验要求。

FSRP-3（Follistatin-related protein3，卵泡抑素相关蛋白-3）作为一种新的抑制型单链糖基化蛋白是在慢性淋巴结白血病病人的B细胞中发现的。FSRP-3具有多种生理功能，包括细胞增殖与凋亡、新陈代谢、分化和免疫反应等。FSRP-3几乎在所有的间质谱系细胞均有表达，特别是在成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成纤维细胞内表达更多，因为这些细胞可由转化生长因子TGF、IL-IB、TNF-a、IL-6等诱导表达FSRP-3。

因此开发一种添加FSRP-3草鱼肌肉卫星细胞专用培养基既为阐明淡水鱼类肌卫星细胞分化过程的分子调控机理，以期为更深一步揭示鱼类肌肉胚后生长发育调控机制奠定基础，也将为我国鱼类肉质品质改良和促进水产业优质、高效和健康发展提供重要的理论依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种专用于草鱼肌卫星细胞、能使草鱼肌肉卫星细胞旺盛生长、节省细胞培养周期的培养基。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：

一种草鱼FSRP-3在培养基中的应用，所述培养基添加的营养物质包括草鱼FSRP-3，所述培养基用于草鱼肌卫星细胞的培养。

上述的应用，优选的，所述草鱼FSRP-3通过以下方法获得：收集草鱼早期胚胎并破碎，将胚胎破碎液以1200-1500r/min离心10-15min，静置后取上清液过含草鱼FSRP-3单抗层析柱，获得纯化草鱼FSRP-3。

作为一个总的发明构思，本发明还提供一种草鱼肌卫星细胞专用培养基，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括：草鱼FSRP-3（草鱼卵泡抑素相关蛋白-3）、草鱼源血清提取物、丙酮酸钠、谷氨酸和维生素E。

上述的草鱼肌卫星细胞专用培养基，优选的，按培养基体积计，所述添加物的含量为：草鱼FSRP-3 0.2-2mg/L、草鱼源血清提取物1-10mg/L、丙酮酸钠5-20mg/L、谷氨酸2-10mg/L、维生素E 5-20mg/L。

与现有技术相比，本发明的优点在于：