[发明专利]磁性氧化石墨烯复合材料固定化辣根过氧化物酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种磁性氧化石墨烯复合材料固定化辣根过氧化物酶的制备方法，其特征在于，所述方法操作如下：

首先取载体材料磁性氧化石墨烯复合材料GO-Fe₃O₄-6-arm-PEG-NH₂，加入戊二醛溶液中进行活化；再用磁铁回收载体材料，配置成浓度为4-10mg/L的悬浮液；将辣根过氧化物酶溶液与活化过的载体材料悬浮液混合，在20-50℃下孵育30-240min，用磁铁分离固定化后的载体材料，保留上清溶液待测；用缓冲溶液冲洗材料以去除未固定的辣根过氧化物酶，其中所述磁性氧化石墨烯复合材料GO-Fe₃O₄-6-arm-PEG-NH₂呈现近乎透明的薄膜状，具有超顺磁性利于回收；其表面有丰富的氨基。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述载体材料与戊二醛溶液的用量比例为1mg:1mL；其中戊二醛溶液浓度为0.05-0.25mol/L，所述活化的条件为50℃下活化6小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述载体材料与戊二醛溶液的用量比例为1mg:1mL；其中戊二醛溶液浓度为0.1 mol/L，所述活化的条件为50℃下活化6小时。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中所述的载体材料悬浮液的浓度为6mg/L；所述孵育为在35℃下孵育120min。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述磁性氧化石墨烯复合材料GO-Fe₃O₄-6-arm-PEG-NH₂的制备方法如下：

（1）合成表面羧基化的氧化石墨烯GO-COOH；

（2）合成磁性氧化石墨烯GO-Fe₃O₄；

（3）合成磁性氧化石墨烯复合材料GO-Fe₃O₄-6-arm-PEG-NH₂：

将上述产物磁性氧化石墨烯GO-Fe₃O₄加入水中溶解，再加入6-arm-PEG-NH₂水溶液超声分散，先加入EDC室温下搅拌0.5-4小时，再加入EDC搅拌后，磁性分离产物，用去离子水洗涤至中性；放入烘箱干燥至恒重。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的磁性氧化石墨烯与6-arm-PEG-NH2水溶液用量比为200 mg：10-30 mL；所述6-arm-PEG-NH2水溶液的浓度为5 mg/mL。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的超声时间为1小时。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述第一次加入EDC的量为40mg，搅拌时间为0.5-4 h；第二次加入EDC的量为52 mg，搅拌12小时。

9.一种磁性氧化石墨烯复合材料固定化辣根过氧化物酶，其特征在于，所述的固定化辣根过氧化物酶由所述的由磁性氧化石墨烯复合材料GO-Fe₃O₄-6-arm-PEG-NH₂固定化制备而成，所述固定化辣根过氧化物酶的最适温度为55℃，最适pH为7.0。

10.权利要求9所述的一种磁性氧化石墨烯复合材料固定化辣根过氧化物酶用于对污染物苯酚的降解。