[发明专利]一种假单胞菌及其鉴定方法和应用

说明书

本发明涉及微生物技术领域的一种假单胞菌及其鉴定方法和应用。该假单胞菌16S rDNA的基因序列如SEQ ID NO.1所示，菌株为SINOPEC21在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC NO：M2016111。该菌株在油气藏上方土壤中的丰度与油气藏上浮气态烃浓度呈正相关，可用作油气微生物，指示油气藏上方烃类渗漏高值区域。同时，该菌株在油气藏上方土壤中的丰度较高，无需扩增培养，通过改进的引物即可对土壤中的假单胞菌SINOPEC21的16S rDNA保守序列进行扩增，可准确、高效地判断油气藏上浮气态烃的浓度，解决了传统生理生化检测周期长，对样品培养物纯度要求高的不足。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种假单胞菌及其鉴定方法和应用。

背景技术

微生物勘探技术的核心是油气指示微生物的鉴定。通常情况下勘探过程中所 研究的目标微生物在环境中的相对丰度很低，因此需在传统的特异培养条件下刺 激油气藏环境与非油气藏环境中烃类氧化细菌的快速繁殖。上述方法虽然可以获 得微生物的数量信息，但是该数量信息事实上成几何倍数地高于原位环境中的微 生物数量，不可避免地掩盖了油气藏与非油气藏环境中微生物数量上的差异，同 时也无法获得不可培养微生物的信息。另外，油气微生物的生长除受烃类影响， 还会受到周围环境的影响，如土壤的湿度、pH值、盐度或其中的关键离子、营 养物质和扰动等。若微生物发育的相对强弱是由环境因素所引起，则会造成油气 富集或贫乏的假象。

假单胞菌为假单胞菌属，该菌为直或稍弯的革兰氏阴性杆菌，是无核细菌， 以极生鞭毛运动，不形成芽孢，化能有机营养，严格好氧，呼吸代谢，从不发酵。 模式属为假单胞菌属，此属有29种，其中至少有3种对动物或人类致病。假单 胞菌多分布于土壤和水中及各种植物体，有极强分解有机物的能力，可以将多种 有机物作为能量来源。此外，由于假单胞菌在自然条件下可以在污染的环境中存 活，因此可作为生物去污的接种介体，在生物降解去污领域具有很大的应用前景。 在普光气田油气藏上方土壤中该菌占较大的丰度，为了进一步确定该菌与油气微 生物勘探之间的关系，对其典型菌株的获取及检测技术进行开发研究。

目前，假单胞菌的常见检测鉴定方法有两种：1.生理生化鉴定，通过分离出 的纯菌，对微生物生理生化进行定性研究，该方法周期长且对培养物纯度提出较 高的要求；2.基因提取后进行16S rDNA的测序，该方法仍需获取纯培养物进行 全基因提取，再通过通用16S rDNA引物获取保守序列进行测序。

因此，为了能够快速、准确获取油气田上方假单胞菌的特征信息，急需对其 典型菌株的获取及混合体系中的检测技术进行开发研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供了一种假单胞菌及 其鉴定方法，该菌株在油气藏上方土壤中的丰度较高，且所述假单胞菌在油气藏 上方土壤中的丰度与油气藏上浮气态烃浓度呈正相关，因此该菌株可用作油气微 生物，指示油气藏上方烃类渗漏高值区域。

本发明还提供了一种利用所述假单胞菌指示油气藏上浮气态烃浓度的方法， 该方法采用改进的引物对所述假单胞菌的16S rDNA保守序列进行扩增，根据扩 增产物中目标条带的亮度，可准确、高效地判断油气藏上浮气态烃的浓度。

为此，本发明一方面提供了一种假单胞菌，其16S rDNA的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

根据本发明，所述假单胞菌的菌株为SINOPEC21，在中国典型培养物保藏中 心的保藏号为CCTCC NO：M2016111。

根据本发明，所述假单胞菌的生物学特征为：在固体培养基上的菌落形态呈 圆形、浅粉色、扁平湿润、边缘不整齐，在显微镜下的细胞形态呈杆状、极生鞭 毛，革兰氏染色反应呈阴性。

在本发明的一些实施方式中，所述的固体培养基为甲醇固体培养基或丁醇固 体培养基；具体地，所述的甲醇固体培养基的组成如下(1L去离子水中)：