[发明专利]一种检测脑炎病毒的引物组合及应用、试剂盒在审
| 申请号: | 201710759502.6 | 申请日: | 2017-08-29 |
| 公开(公告)号: | CN107299157A | 公开(公告)日: | 2017-10-27 |
| 发明(设计)人: | 刘岚铮;杨国樑;韩秀云;吕燕;赵红;王春荣;关恒云 | 申请(专利权)人: | 济南市疾病预防控制中心 |
| 主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司: | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371 | 代理人: | 李进 |
| 地址: | 250000 *** | 国省代码: | 山东;37 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 检测 脑炎 病毒 引物 组合 应用 试剂盒 | ||
1.一种检测脑炎病毒的引物组合,其特征在于,所述引物组合包括检测肠道病毒的第1引物对、检测乙脑病毒的第2引物对、检测单纯疱疹病毒的第3引物对中的至少一种以及通用引物对;所述第1-3引物对的碱基序列如SEQ ID No.1-6所示;所述通用引物对的碱基序列如SEQ ID No.7-8所示。
2.根据权利要求1所述的检测脑炎病毒的引物组合,其特征在于,所述第1-3引物对和所述通用引物对包括上游引物和下游引物;所述第1-3引物对的上游引物序列包括所述通用引物的上游引物序列,所述第1-3引物对的下游引物序列包括所述通用引物的下游引物序列。
3.如权利要求1或2所述的引物组合在制备检测脑炎病毒的试剂盒中的应用。
4.一种检测多种脑炎病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括如权利要求1或2所述的引物组合。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,还包括PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、dNTPs和反转录酶中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述PCR反应缓冲液包括Tris·HCl、KCl、MgSO4和(NH4)2SO4。
7.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,还包括病毒RNA提取试剂。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述RNA提取试剂包括DNase溶液、无水乙醇、异丙醇和氯仿。
9.如权利要求4-8任一项所述的试剂盒在检测病毒RNA中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,包括以待检样本为模板,进行PCR反应;
PCR反应程序为:50-51℃逆转录30min;95-96℃,预变性15min;95-96℃变性30s,62-68℃复性45s,72-73℃延伸30s,10个循环;95-96℃,变性30s;52-58℃复性30s;72-73℃,延伸30s,30个循环。
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