[发明专利]CBX4作为HIV-1潜伏感染激活靶点的应用

说明书

本发明公开了CBX4作为HIV‑1潜伏感染激活靶点的应用。本发明通过研究发现抑制CBX4具有良好的HIV‑1潜伏激活能力，敲低CBX4能够有效促进HIV‑1 LTR的转录；本发明继而在J‑lat 10.6 HIV‑1潜伏感染细胞模型中发现敲低CBX4，GFP基因表达上调，HIV‑1能够被有效激活。在TZM‑bl细胞中过表达CBX4蛋白能够有效降低HIV‑1的LTR的转录活性。进一步检测发现CBX4蛋白表达降低会降低HIV‑1 LTR的H3K9三甲基化，H3K27三甲基化的富集程度，从而激活HIV‑1潜伏感染。CBX4作为全新HIV‑1潜伏感染激活靶点在HIV‑1潜伏感染的激活方面具有重要的研发价值和开发意义。

技术领域

本发明涉及疾病相关功能靶点技术领域，具体地，涉及HIV-1潜伏感染激活靶点技术领域，更具体地，涉及CBX4作为HIV-1潜伏感染激活靶点的应用。

背景技术

HIV-1病毒是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒，它通过攻击人体T淋巴细胞，破坏人体免疫系统，最终导致获得性免疫缺陷综合征“艾滋病”的产生。该病毒最初发现于1981年，在此之后的三十余年研究人员一直致力于对该病毒控制及清除，期望能够治愈该疾病。目前的常规治疗方法为简称cART的联合抗逆转录病毒疗法，该治疗方法能够有效的抑制病毒的复制，从而将病人外周血中的病毒载量控制到较低的水平。但是目前的通用治疗方法只能够在一定程度上控制病毒，并不能有效的清除。究其原因是因为HIV-1可潜伏在细胞内形成HIV-1储藏库，常规药物不能影响这些储藏库，并且病人一旦停止治疗，它们会因为各种原因被激活，从而导致病情反复。综上所述，HIV-1储藏库的存在已成为HIV-1治愈的巨大障碍，如何有效的清除HIV-1储藏库是目前HIV-1领域的研究热点之一。当今的主流方法“shock and kill”是采用先激活后杀灭的思路。因此，研发安全、高效的HIV-1潜伏感染激活剂是当前亟待解决的问题之一。目前已有多种HIV-1潜伏感染激活剂被开发，根据它们的作用靶点可以分为以下几种类型，包括：组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)、组蛋白甲基转移酶抑制剂（HMTi）、DNA甲基转移酶抑制剂（DNMTi）、蛋白激酶C激活剂（PKC）、Bromodomain抑制剂。

CBX4属于CBX蛋白家族，是多梳蛋白复合体PRC1的重要组分。CBX蛋白家族包括：CBX2，CBX4，CBX6，CBX7，CBX8五个成员。它们的N端拥有一个CHROMO结构域，这个结构域具有H3K27三甲基化的结合能力；C端有一个保守区域叫做C-Box，它负责PRC1复合体的组装。其中CBX4不仅对H3K27三甲基化有一定的亲和性，其与H3K9三甲基化也表现出显著的亲和力。现有技术中报道的CBX4的功能主要为参与调控个体发育、干细胞分化以及肿瘤的发生。截至目前为止尚未有研究未公开CBX4是一个全新的HIV-1潜伏感染激活作用靶点。

发明内容

本发明的目的在于提供CBX4作为HIV-1潜伏感染激活全新靶点的应用。为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

本发明通过研究发现抑制CBX4具有良好的HIV-1潜伏激活能力。本发明通过敲低TZM-bl细胞中的CBX4基因的表达量，使用双荧光素酶报告基因检测HIV-1的LTR的转录水平，结果发现敲低CBX4能够有效促进HIV-1 LTR的转录。本发明继而在J-lat 10.6 HIV-1潜伏感染细胞模型中有效敲低CBX4蛋白的表达情况，发现J-lat10.6细胞能够有效被激活，GFP基因表达上调。本发明还构建CBX4表达质粒，在TZM-bl细胞中过表达CBX4蛋白，双荧光素酶报告基因检测发现，随着CBX4蛋白表达增加，HIV-1的LTR的转录活性相应降低，两者的关系存在浓度梯度效应。进一步检测发现CBX4蛋白表达降低会降低HIV-1 LTR H3K9三甲基化，H3K27三甲基化的富集程度，从而激活HIV-1潜伏感染。所以，本发明要求保护CBX4作为HIV-1潜伏感染激活靶点的应用。