[发明专利]一种基于免疫磁性纳米材料光热效应的鼠伤寒沙门氏菌快速检测方法

说明书

本发明建立了一种基于免疫磁性纳米材料光热效应的鼠伤寒沙门氏菌快速检测方法，利用免疫磁性纳米材料的光热效应建立了温度升高值与鼠伤寒沙门氏菌数目间的标准曲线，可将样品产生的温度升高值带入标准曲线得到样品中的细菌数目。同时，利用免疫磁性纳米材料的磁性与光热效应，实现了富集分离‑检测‑试样灭活三个环节的有效整合，本方法灵敏、安全、快速、便携、成本低，经实验验证，基于免疫磁性纳米材料光热效应的鼠伤寒沙门氏菌方法最低检测限为300个细菌，且温度升高值ΔT与细菌数目在300～1000范围内成线性相关关系，因此本发明具有良好的实际应用前景，可应用于对鼠伤寒沙门氏菌的实际快速检测。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，特别涉及一种基于免疫磁性纳米材料光热效应的鼠 伤寒沙门氏菌快速检测方法。

背景技术

由食源性致病菌引起的食品安全问题一直是世界卫生组织及各国政府高度重视的 全球性问题，也是食品安全管理与控制的核心与难点之一。沙门氏菌病是重要的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌属肠道细菌科，可引起食物中毒。

当前沙门氏菌的检测方法一般均需增殖步骤，以增加病原的可检出率，费时费力，需4～7天才能完成，无法及时、快速评价食品中沙门氏菌的含量。目前利用菌体或鞭毛 抗原特异性抗体的免疫学方法是快速检测方法的主要研究方向。已经建立的沙门氏菌免 疫学检测方法有酶联免疫法、荧光免疫法、放射免疫法、免疫传感器等，此类方法可以 酶标板、试纸条、膜或电极等作为固定载体。其中，基于试纸条或膜的方法最为简单快 速，无需大型仪器，适用于定性或半定量分析。由于多数待测样本为阴性，对于大样本 量的快速定性或半定量筛查能大大提高检测效率，因此，此类快速检测方法非常适用于 大样本量快速筛查。但由于此类方法大多采用目视或简易检测设备，灵敏度仍然相对较 低，只有提高灵敏度，再配以用于富集净化的前处理步骤才能适用于复杂基质的食品样 品中沙门氏菌的快速筛查。

由上述分析可知，目前绝大部分致病菌检测方法是将富集分离-检测-试验灭活分为 三个环节进行，步骤多，耗时长，且目前多数关于分析时间的报道只涉及检测这一环节，而从样品处理至试样灭活整个分析过程所需时间不少于2h，若需增菌环节将不少于10 h，且现有致病菌检测方法的检测灵敏度仍有待提高。有鉴于此，亟需提供一种对沙门 氏菌灵敏、安全、快速、便携、低成本的检测方法。

发明内容

针对上述现有技术的不足，发明人提供一种基于免疫磁性纳米材料光热效应的鼠伤 寒沙门氏菌快速检测方法，该方法采用免疫磁性纳米材料同时实现对鼠伤寒沙门氏菌捕 获、检测及灭活，同时利用激光照射免疫磁性纳米材料产生的温度变化，建立温度升高值与鼠伤寒沙门氏菌数目的标准曲线，实现对鼠伤寒沙门氏菌的定量检测。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

本发明的第一个方面，公开了免疫磁性纳米材料在鼠伤寒沙门氏菌快速检测中的应 用。将所述免疫磁性纳米材料添加到鼠伤寒沙门氏菌中，具体的，通过在羧基磁珠上标记抗鼠伤寒沙门氏菌抗体从而制得免疫磁性纳米材料，进而与鼠伤寒沙门氏菌进行偶 联，实现对鼠伤寒沙门氏菌捕获。

其中，所述免疫磁性纳米材料的制备方法为：

1)取羧基磁珠，超声，磁分离，用双蒸水清洗；向其中加入EDC/NHS溶液，在 室温条件下活化，再进行磁分离，用PBS溶液反复清洗后得活化后磁珠；

2)向活化后的磁珠中加入抗鼠伤寒沙门氏菌抗体，室温条件下反应一段时间，磁分离，然后用PBS溶液反复清洗，得免疫磁性纳米材料。

其中，所述羧基磁珠的粒径为10～300nm(优选为200～300nm)；该粒径下获得 的免疫磁性纳米材料光热效应最佳，同时磁分离时间短，且对细菌的非特异吸附低。

本发明的第二个方面，公开了一种基于免疫磁性纳米材料光热效应的鼠伤寒沙门氏 菌快速检测方法，其具体步骤包括：