[发明专利]一种新的诊断乳腺浸润性导管癌的应用

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤诊断技术领域，具体地说，是COL5A1在诊断乳腺浸润性导管癌中的应用。

背景技术

乳腺癌最常见的组织学类型是浸润性导管癌，占乳腺癌的90％以上，目前尚不具备能够完全治愈乳腺癌的方法。在乳腺浸润性导管癌患者肿瘤组织中V型胶原α1链(Type V collagenα1chain，COL5A1)的表达对乳腺癌及乳腺癌细胞株的影响目前尚未见报道。

中国专利文献CN104685065A公开了一种从正常乳腺至原位导管癌的转化和至浸润性导管癌转化的microRNA，中国专利文献CN105648043A公开了COL5A1作为矮小基因，未见COL5A1在诊断乳腺浸润性导管癌中的应用的报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供COL5A1的新用途。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：COL5A1作为诊断标志物在制备诊断乳腺癌的诊断产品中的应用。

进一步地，用于诊断乳腺浸润性导管癌。

进一步地，所述的诊断产品为诊断试剂或诊断试剂盒。

检测COL5A1的试剂作为诊断乳腺癌的诊断试剂盒的应用。

进一步地，用于诊断乳腺浸润性导管癌。

一种治疗乳腺浸润性导管癌的药物，所述的药物可降低COL5A1的表达。

一种治疗乳腺浸润性导管癌的药物，所述的药物以COL5A1为靶点。

本发明优点在于：

本发明首次发现COL5A1在乳腺浸润性导管癌中特异性表达升高，针对COL5A1进行靶向敲低后可抑制乳腺癌细胞株MCF-7增殖，显示出COL5A1是潜在的乳腺癌诊断、治疗靶点标志物，研发相关的试剂或药物能够提高乳腺癌(主要是浸润性导管癌)的诊断、治疗效果，或作为目前主流治疗药物的辅助用药。

附图说明

附图1：乳腺组织的COL5A1免疫组织化学染色及mRNA表达水平。

附图2：COL5A1敲低后对MCF-7和MCF-12A增殖的影响。B部分的三条线自上而下分别为：空白，C-siR，COL5A1-siR。

附图3：COL5A1敲低后对MCF-7和MCF-12A侵袭和迁移的影响。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1：COL5A1在乳腺组织标本中的表达比较

(1)COL5A1是乳腺癌发生发展的进展性标志物(χ²检验)，在乳腺浸润性导管癌中表达增高。

(2)COL5A1和浸润性导管癌临床病理特征的关联性

通过实验，我们发现COL5A1在浸润性导管癌中的表达不受年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分级等情况制约，但与ER、PR表达差别正相关。

实验材料和方法：

1、组织样本

在外科手术后30分钟之内，将组织放入4％多聚甲醛溶液中固定24小时，部分新鲜组织直接进行后续实验。所有经固定好的乳腺组织进行梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。

2、免疫组织化学

1)将石蜡切片60℃烤片30min，梯度酒精常规脱蜡水化(100％乙醇两次，5min/次；95％乙醇一次，3min；85％乙醇一次，3min；75％乙醇一次，3min)，PBS缓冲液清洗；

2)切片放入柠檬酸缓冲液(浓度为0.01M，pH 6.0)中，微波炉高温2min修复抗原，冷却至室温，PBS缓冲液清洗；

3)3％H₂O₂-甲醇封闭内源性过氧化物酶，室温10min；

4)孵育COL5A1一抗，4℃冰箱过夜；

5)PBS缓冲液清洗后孵育二抗1h；

6)滴加新鲜配置的DAB显色液，室温下染色5min，蒸馏水洗终止显色；

7)苏木素复染1min、水洗、1％盐酸酒精分化后充分水洗返蓝，中性树胶封片；

8)两位病理科医生独立拍片并评分。

3、Western blotting免疫印迹

1)新鲜组织加入RIPA裂解液提取组织蛋白；

2)BCA法检测蛋白浓度；

3)样本加入loading buffer并热变性10min；

4)配制SDS-PAGE胶，按照每孔50ug蛋白上样并电泳；

5)样本蛋白转膜至PVDF膜；

6)5％脱脂牛奶封闭1h；