[发明专利]用于血脂分型检测的试剂

说明书

本发明公开一种用于血脂分型检测的试剂，其特征在于：所述试剂包括：烷基酚聚氧乙烯醚，曲拉通X‑100，胆固醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶，磷酸盐缓冲液，苯酚，4‑氨基安替比林，PC300。本发明的试剂配方，通过添加特定比例和配比的烷基酚聚氧乙烯醚和曲拉通X‑100，能够使得脂蛋白被溶解掉，释放出内部含有的胆固醇或胆固醇酯，胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下生成胆固醇，胆固醇经过胆固醇氧化酶的作用生成胆甾‑4‑烯‑3‑酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下与苯酚、4‑氨基安替比林(4‑AAP)作用生成有色物质，通过检查吸光度的变化，计算不同的脂蛋白的含量。

技术领域

本发明属于体外诊断领域，具体而言是检测血清样本中的不同密度的脂蛋白中的胆固醇含量。

背景技术

血液中的脂蛋白可以根据其密度大小分为高密度脂蛋白(HDL)，低密度脂蛋白(LDL)，极低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒(CM)四大类。不同种类的脂蛋白胆固醇对于引起动脉粥样硬化的能力不一样。通常临床上检测最多的组分是高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，就常规而言，高密度脂蛋白胆固醇对于动脉血管有一定的保护作用，其含量高发生心血管疾病的风险就低，低密度脂蛋白胆固醇则易引起动脉粥样硬化，增大发生心血管疾病的风险。然而，最近的研究表明，即使LDL-C的含量较低，有部分人群也容易发生心血管疾病，而部分LDL-C含量较高的人群却不一定会发生心血管疾病。这可能与LDL-C的不均一性有关，有研究显示，低密度脂蛋白的亚组分中颗粒较小密度较大的LDL称为小而密低密度脂蛋白(small dense Low-Density Lipoprotein，简称sdLDL)；而将颗粒较大、密度较低的LDL称为大而轻LDL。相比之下，sdLDL致动脉粥样硬化的能力更强，是目前公认的引发心血管疾病的重要危险因子之一。高密度脂蛋白胆固醇事实上也有较大的不均一性，按照密度来区分，可将HDL分为HDL2和HDL3，其中HDL2的密度较小颗粒较大，HDL3的密度较大颗粒较小，检测HDL的亚型与动脉粥样硬化的相关性更大。VLDL是富含甘油三酯的脂蛋白，目前临床上没有良好的检测手段，导致该项目在临床上并未得到推广，通常情况下，只是检测甘油三酯的含量来大致估算，且并不准确。脂蛋白(a)是人血浆中的一类特殊的脂蛋白，其特点是一分子的载脂蛋白(apo)B以二硫键与apo(a)相连，其含量高低主要与遗传因素相关。通常临床上检测Lpa是通过检测其上的apo(a)蛋白，但由于其具有多个重复结构，导致很多利用免疫法检测的结果并不准确。其它的如中间密码脂蛋白(IDL)，残粒样脂蛋白胆固醇(RLP-C)等，均与心血管疾病相关，但由于检查步骤繁琐，基本上很少应用到临床上。

目前常规的临床检测方法都只能检测一个或少数几个指标，能够同时检测多个指标，或者能够反应脂蛋白胆固醇分布的技术非常有限，并且基本停留在科研阶段，真正实现临床应用的并不多。其中电泳法是发展比较早的一门技术，在脂蛋白的检测中经常用到，首先经过电泳分离脂蛋白后，再用相应的方法染色，如染色脂蛋白，也有染色胆固醇的，在通过扫描将数据收集分析。该方法由于中间步骤繁琐，电泳分离精度和染色扫描等步骤的精度问题，使得该方法的精密度和准确度有待考量。另一种方法是核磁共振法，但是该法的技术门槛较高，不仅仪器昂贵，且对操作人员的要求高，故而该方法更加适合于科研用途，而在临床检验中推广有一定的难度。相比之下，美国专利US5284773，US5633168公开了一种血浆脂蛋白及其亚组分检测技术，该技术在精密度、准确度等方面均有一定的优势。该技术是利用超速离心分离脂蛋白，再用专用仪器检测连续的脂蛋白胆固醇，进而得出脂蛋白胆固醇谱图，计算各个组分的脂蛋白胆固醇含量。本文将该专用血脂检测的仪器称为血脂分型检测仪。由于该技术利用了垂直转子，使得离心时间大大缩短，且所需的样本量为50ul。但是该血脂分型检测仪需要相应的检测试剂，当样本与试剂混合时，流经一个连续的管路，在管路中完成反应，并经检测器检测。由于管路越长，反应时间就越长，反应就能够进行得越充分，但与此同时当管路越长的时候，检测的分辨率就越差，而想要提高分辨率，就必须缩短管路，这就造成了矛盾。目前常规的检测试剂，一般需要120s以上才能是反应基本完成，且检测线性范围较窄，不利于在血脂分型检测仪器上进行反应。