[发明专利]用于诊断不明原因复发性流产的增强子RNA组合、引物组及应用和试剂盒

说明书

本发明属于基因工程领域，涉及用于诊断不明原因复发性流产的增强子RNA组合、引物组及应用和试剂盒。所述增强子RNA组合包括：与SEQ ID NO：1所示核苷酸序列具有90％以上同源性的第一增强子RNA、与SEQ ID NO：2所示核苷酸序列具有90％以上同源性的第二增强子RNA和与SEQ ID NO：3所示核苷酸序列具有90％以上同源性的第三增强子RNA。本发明利用筛选出的增强子RNA组作为新的标志物，制备用于不明原因复发性流产诊断或监测的试剂盒，具有灵敏度高、检出谱系广、成本低等优点。

技术领域

本发明属于基因工程领域，更具体地，涉及用于诊断不明原因复发性流产的增强子RNA组合、引物组，以及增强子RNA组合与引物组的应用和试剂盒。

背景技术

复发性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指临床上连续2次或2次以上的孕20W前或胎儿体重不足500g的妊娠丢失，其发生率约占妊娠结局的1％～3％。RSA的病因极其复杂，目前已明确的病因有染色体异常、生殖解剖结构异常、内分泌失调、生殖系统感染、自身免疫和环境因素等，但临床上仍有50％～60％的RSA找不到明确的病因，称为不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)。胚胎发育异常是发生URSA的主要原因。胚胎发育是有机体从其生命起始到成熟的复杂进程，受一系列环境因素、遗传因素和表观遗传修饰的调控。

近年来，长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)重要生物学功能的发现使其成为生命科学研究的一大焦点，它们可在表观遗传、转录以及转录后等多个层面上调控基因的表达。在整个基因组转录产物中，lncRNA所占的比例远远超过编码RNA所占的比例。不同于编码RNA，lncRNA的保守性要差得多，然而在其分子内部，却含有较为保守的局部区段，且其表达具有时空特异性，这些现象都提示了lncRNA具有重要的生物学功能。

当lncRNA与转录因子结合之后，lncRNA能与目的基因形成染色质环从而调控靶基因的时空表达。2010年Greenberg在小鼠神经细胞中发现，分布在整个基因组中、由神经细胞去极化作用所激活的增强子均被转录，且增强子转录产生的lncRNA与增强子邻近的基因所转录的mRNA相关联。Rosenfeld等研究发现，在乳腺癌细胞中，雌激素与其受体结合会诱导lncRNA的转录，进而提高特定基因的表达，通过RNAi技术去除这些lncRNA，会减弱增强子上调基因表达的能力，同时减少增强子与启动子之间的成环现象。在胚胎发育方面，lncRNA的作用也正逐渐被证实。大量研究表明，lncRNA是胚胎发育和疾病发生过程中关键性的转录元件，可能是决定胚胎发育中基因时空表达的最早期分子之一，参与调控生长发育相关的基因。Samir等报道胚胎心脏发育受到lncRNA及其靶基因调控，lncRNA在胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中发挥了一定作用。

lncRNA大多转录自“基因沙漠区”，但有些可以转录自基因组上的增强子(enhancer)元件，这类lncRNA被称为增强子RNA(enhancer RNA,eRNA)。增强子是DNA上可与转录因子结合的区域，可以位于基因上游，也可位于基因下游，甚至远离受调控的基因，且常伴有组蛋白的不同修饰。当与转录因子结合之后，增强子能与目的基因形成染色质环从而调控靶基因的时空表达。

目前还没有将增强子RNA应用于不明原因复发性流产辅助诊断的报道，若能筛选出不明原因复发性流产相关的增强子RNA作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，对不明原因复发性流产的诊断现状必将是一次有力的推动，也为其药物筛选、药效评价及靶向治疗开辟了一条新的途径。

发明内容

本发明的目的是提供用于诊断不明原因复发性流产的增强子RNA组合、引物组及应用和试剂盒。