[发明专利]检测小焦虫的引物对、套组及方法

说明书

一种检测小焦虫(Babesia gibsoni)的引物对、套组及方法，引物对具有一顺向引物及一逆向引物，套组具有一引物对及一探针，其中，顺向引物的序列如序列编号1所示，逆向引物的序列如序列编号2所示，探针的序列如序列编号3所示。

【技术领域】

本申请系关于一种检测焦虫的引物对、套组及方法，尤指一种检测小焦虫的引物对、套组及方法。

【现有技术】

全世界有许多种类的焦虫(Babesia spp.)可感染犬只，其中以犬焦虫 (Babesiacanis)，又称大焦虫，以及小焦虫(Babesia gibsoni)最常见。小焦虫主要分布在亚洲，包含日本、韩国、台湾及马来西亚，近年来发现小焦虫也广泛分布在非洲、中东、巴西、北美洲及澳洲。小焦虫是一种寄生于宿主红血球内的原生动物寄生虫，并造成犬只患有焦虫病。此疾病主要经由壁虱而自然传播，但许多报告也显示了经由狗咬及输血的传播途径，以及传染至发展中胎儿的传播途径。小焦虫感染通常发生在犬只，且由于造成的急性型疾病常引发严重的临床症状，例如发烧、血小板过低、再生性贫血、脾肿大甚至死亡，故近年在临床上已被视为严重问题。此外，被感染的动物也可能成为慢性带原者，并经由壁虱传染至其他动物。因此，为了控制小焦虫感染，必须要有快速且准确的诊断，并接续实时且有效的治疗，以及慢行带原者的预防。

由于大焦虫及小焦虫的治疗方法不同，因此需要快速且正确诊断出小焦虫感染，以免延误病情。然而，小焦虫并不容易诊断。目前用于小焦虫诊断的方法包括血液抹片、血清诊断及分子诊断，但前述方法皆有其限制。

虽然兽医师可透过Giemsa染色法直接从血液抹片上判断病原，但此方法不容易区别出大焦虫及小焦虫，且此方法有赖受过良好训练及经验丰富的技术人员，才能做出正确判断。此外，此方法要采用新鲜的检体，以保持生物活性及型态，故检体须迅速进行处理。

血清诊断有助于辨识小焦虫抗体的存在，然而血清诊断无法区分出急性感染及慢性感染。血清诊断的限制更在于交叉反应，尤其在不同的焦虫种类之间，使得检测的特异性不佳，以及在年轻或免疫抑制的犬只上，或是在免疫转换发生前的感染初期，都可能产生伪阴性的检测结果。

目前诊断小焦虫较佳的方式之一便是分子诊断，尤其是利用聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction,PCR)进行检测。聚合酶连锁反应是一种更灵敏且更具特异性的技术，提供了诊断焦虫症(babesiosis)的另一替代方案，而18S rRNA的基因序列即被用来分辨各种种类的焦虫及相关原生动物。举例而言，由引物设计有限公司(PrimerdesignLtd.)所提供的焦虫检测套组(canine babesiosis 18S ribosomal RNA(18S)genegenesig standard kit)可用来检测犬只所感染的焦虫症，然而，此套组也无法区别大焦虫及小焦虫的感染。

因此，为了能选择适当的治疗方式以避免延误病情，实有必要提供一种能专一地检测出小焦虫的技术方案。

【发明内容】

本申请之一实施例的目的在于提供一种用以检测小焦虫(Babesia gibsoni)的引物对，具高灵敏性及高特异性，以快速且准确的诊断出小焦虫感染，进而选择适当的治疗方式，避免延误病情。

本申请之一实施例的另一目的在于提供一种用以检测小焦虫的套组，其具高灵敏性及高特异性，以快速且准确的诊断出小焦虫感染，进而选择适当的治疗方式，避免延误病情。

本申请之一实施例的又一目的在于提供一种用以检测小焦虫的方法，其具高灵敏性及高特异性，以快速且准确的诊断出小焦虫感染，进而选择适当的治疗方式，避免延误病情。

为达上述目的，本申请之一实施例提供一种用以检测小焦虫的引物对，包含一顺向引物或其互补序列及一逆向引物或其互补序列，其中，顺向引物的序列为5’-TTGAAACTTGTCGAGCTG-3’，逆向引物的序列为 5’-TGGAATCTTCCACGACTG-3’。