[发明专利]一种利用DPX枪头式分散固相微萃取柱萃取及分析β-受体激动剂类瘦肉精的方法

说明书

一种利用DPX枪头式分散固相微萃取柱萃取及分析β‑受体激动剂类瘦肉精的方法。它涉及一种DPX枪头式分散固相微萃取柱(DPX tips^TM)，能够匹配各种手动及自动移液系统，能够快速、高效的完成肉类样品处理及萃取，可完美地弥补传统样品处理费时费力、增加仪器损耗等缺点。简便快捷的固相萃取法，与液相色谱‑质谱(HPLC‑MS)分析相结合，可在10分钟内同时完成96‑384个样品的纯化，并可实现动物源性食品中多种β‑受体激动剂类瘦肉精的高通量快速定性、定量检测。

技术领域

本发明属于食品添加剂检测领域，具体涉及一种利用DPX枪头式分散固相微萃取柱萃取动物源食品中瘦肉精的方法，以及适用的定量检测方法。

背景技术

我国是养猪业大国，生猪出栏量每年约为6.4亿头，猪肉总产量已居世界首位。但由于我国生猪养殖水平总体较低、养殖用药生产和使用管理还不完善，养殖过程违法违规用药问题仍较突出，特别是非法使用“瘦肉精”问题曾在国内外造成了巨大负面影响，由此造成的食品安全问题也引起了国内外高度关注。

“瘦肉精”严格意义上是指一类β-受体激动剂类药物。β-受体激动剂(β-agonists)是一类人工合成肾上腺受体激动剂，包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等十几种化合物。β-受体激动剂在动物体内能减缓或减少脂肪沉积，增加肌肉蛋白沉淀，提高动物胴体瘦肉率、增重和提高饲料转化率，促进动物生长及缩短动物的生长期，故而当用于牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂时，会提高其瘦肉率，故而俗称为“瘦肉精”。但研究发现，长期使用瘦肉精会使其在动物体内蓄积，人类食用含瘦肉精超过安全值的动物肌肉或内脏后，会出现心室早搏、四肢、脸、颈部骨骼肌震颤、心悸、精神紧张、代谢紊乱、头疼、肌肉疼痛、头晕、恶心、呕吐、四肢无力、发烧、战栗等症状，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒，甚至危及生命。由于其严重的危害性，世界各国都禁止其应用于食源性动物。

我国相关法律法规也严禁在生猪等食源性动物养殖过程中使用β-受体激动剂类药物。但是在我国生猪养殖过程中使用各种β-受体激动剂类药物曾一度长时间成为行业潜规则。多年以来，我国相继发生多起较大规模瘦肉精中毒事件。我国在2009年底建立了利用LC-MS/MS监测低残留水平瘦肉精克伦特罗的方法(检测限0.05μg/kg)，但因屠宰管理、养殖用药以及样品代表性差等问题，2010年以来我国出口日本等国家的猪肉制品仍多次被检出克伦特罗残留。

为此，鉴于国内养殖业大环境的实际状况，为保障肉类产品的质量安全，从根本上杜绝β-受体激动剂类药物残留在动物体内，我们必须建立一套保障我国肉类产品质量安全的β- 受体激动剂类药物残留控制体系，并且对完善法律法规是十分必要的。猪肉是世界范围消耗最大的食品，因此对猪肉中β-受体激动剂类药物的检测是世界范围质量监测部门的首要任务。

目前，β-受体激动剂类药物残留的检测方法包括：高效液相色谱法(HighPerformance Liquid Chromatography,HPLC)，气相色谱-质谱法(Gas ChromatographMass Spectrometer, GC-MS)，液相色谱-质谱法(Liquid Chromatography MassSpectrometer,LC-MS)或液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)，毛细管电泳电气化学检测法(Capillary Electrophoresis with Electrochemical Detection,CE-ECD)和免疫测定法(Enzyme Immunoassay,EIA)。其中， LC-MS/MS因其在定量分析中的灵敏度及选择性最高，进而是目前主要使用的分析方法。然而，此方法需要复杂的样品前处理过程以减少基质效应，因此检测时间长、耗时。