[发明专利]一种双波长薄层层析扫描定量分析南极磷虾甘油粗提物中甘油的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品和化工分析技术领域，具体涉及一种双波长薄层层析扫描定量分析南极磷虾甘油粗提物中甘油的方法。

背景技术

甘油，又称1,2,3-丙三醇，丙三醇；分子式为C₃H₈O₃，分子量92.09，沸点290.9℃，是一种无色无臭的粘稠液体，有甜味，易溶于醇和水。由于甘油具有良好的溶解能力且无毒性，常用于食品中作为许多食用香料和食用色素的溶剂，同时，甘油能对皮肤起到滋润作用，广泛的应用于化妆品中。药用等级的甘油，可以在医药上作为润滑剂、甜味剂、渗透剂和抗冻剂。甘油常常与水配合作为抗冻剂使用，66.7％的甘油水溶液冰点最低，为-46.5℃。甘油在多种耐寒动物体内被发现，是一种重要的小分子抗冻剂。由于甘油的用途很广，因此，检测其含量具有重要的意义。

南极磷虾，是一种生活在南冰洋的南极洲水域的甲壳动物，是南极生态系统的关键物种。南极磷虾储量巨大，大约共有5亿吨，并多以群居方式生活，易采集捕捞。南极磷虾常年生活在南极冰下，能够忍受寒冷环境，南极磷虾中甘油的存在，可能与其适应极寒气候有关，有利于磷虾的生存及生理活动。

目前国内外甘油含量的测定方法较多，主要有高碘酸氧化法、cu2+络合比色法、甘油激酶法、紫外--可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、近红外光谱法以及原子吸收法等。高碘酸氧化法操作简便，但受诸多因素的影响(例如pH)，条件不易控制，且需经过较复杂的提纯步骤。比色法和紫外-可见分光光度法结果准确度高，误差小，但需要排除颜色的干扰，而南极磷虾中虾青素含量极高，呈鲜艳的红色，对于检测有极大影响，而去除虾青素的步骤繁琐，复杂。高效液相色谱法和气相色谱法检测精确度高，不易受其他物质的干扰，但检测前为避免仪器的堵塞，也需进行多个去杂步骤，且仪器较为昂贵，检测时间长。而红外色谱需将甘油提纯出来，操作复杂。

发明内容

针对上述现有技术的不足，发明人经长期的技术与实践探索，提供一种双波长薄层层析扫描定量分析南极磷虾甘油粗提物中甘油的方法，该方法可直接对南极磷虾甘油粗提物进行分析检测，操作简便、快速，试验结果准确、可靠。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

本发明的第一个方面，提供了一种双波长薄层层析扫描定量分析南极磷虾甘油粗提物中甘油的方法，具体步骤包括：

1)将甘油标准品溶于甲醇中，制成标准品液；

2)将甘油粗提物作为样品液与标准品液点样于同一薄层硅胶H板中，以二氯甲烷：甲醇＝5:1为展开剂，预平衡20-30min，薄层展开；

3)展开结束后，取薄层硅胶板，晾干，染色；

4)薄层扫描仪进行双波长扫描，通过检测标准品液和样品液的扫描峰面积积分值，计算得到南极磷虾甘油粗提物中甘油含量；

其中，步骤1)中，所述标准品液的浓度为1mg/ml；

步骤2)中，薄层展开展距为8～10cm(优选为9cm)；

步骤3)中，以碱性高锰酸钾显色剂喷板染色，然后在60～70℃下烘烤2～3分钟，在紫色背景下，甘油显黄色；

步骤4)中，双波长参数具体为检测波长276nm，参比波长550nm；

以甘油标准品的质量(μg)为横坐标(X)，峰面积积分值(AU)为纵坐标(Y)，得到回归方程为Y＝-7025.028+6167.319×X，r＝0.99928，sdv＝2.10％；以上述回归方程对样品液中甘油进行分析检测；

其中，所述南极磷虾甘油粗提物的制备方法为：

将新鲜的南极磷虾和无水乙醇按质量体积比1g：(10-15)ml混合，超声提取，滤液蒸干，用无水乙醇溶解得甘油粗提物。

所述超声提取的条件为：30～40℃、250～350W、30～50kHz，提取时间为0.8～1.5h；

优选的，所述超声提取的条件为：35℃、300W、40kHz，提取时间为1h，重复三次，收集滤液；

需要说明的是，尽管使用双波长薄层扫描法进行定量分析检测是一种常规的分析方法，但是，本发明的甘油是从南极磷虾中提取得到的，而且进行检测时采用的原料为甘油粗提物，该粗提物中还含有脂类物质、挥发油和其他成分，由于南极磷虾成分复杂，因此在对甘油粗提物采用双波长薄层扫描法进行定量检测时，如何避免引入的其他干扰成分对检测结果的影响，成为本申请研究的重要内容。