[发明专利]一种黄芪种苗的培养方法

权利要求书

1.一种黄芪种苗的培养方法，所述培养方法包括外植体的准备、增殖培养和生根培养，其特征在于：所述培养方法为利用间歇浸没式生物反应器进行培养，其中：

所述培养方法包括如下具体步骤：

（1）外植体的准备：将黄芪组培苗在无菌操作台中，切成黄芪茎段，接种到装有1L液体培养基的三角瓶中，密封包扎后放到培养室中培养3~5天；

（2）增殖培养：将步骤（1）中的准备的外植体连同液体培养基倒入间歇浸没式生物反应器的罐体中，将所述罐体连接到反应器系统中，设定反应器的间歇浸没频率，在培养室中培养15~20天；

（3）生根培养：在无菌条件下将增殖培养完成的生物反应器罐体中的液体培养基倒出，倒入1L促进黄芪组培苗生根的液体培养基，将上述换液完成的反应器罐体连接到反应器系统中，设定反应器间歇浸没频率，在培养室中培养20~30天；

在所述步骤（1）中，所述黄芪茎段为含有1~3个叶芽黄芪组培苗茎段，所述液体培养基配方为：MS+IBA0.05~0.07mg/L+6-BA0.3~0.6 mg/L+蔗糖30g/L pH5.8~6.0，所述三角瓶连同液体培养基一起进行高温高压湿热灭菌冷却后备用，接种到三角瓶中黄芪茎段的数量50~200个；

在所述步骤（2）中反应器间歇浸没频率为：浸没时间1~10min，间隔时间2~12h；

在所述步骤（3）中促进黄芪组培苗生根的液体培养基配方为：1/2MS+NAA0.1~0.3 mg/L+IBA0.3~0.5 mg/L+AC0.1~0.3g/L+蔗糖40g/L pH 5.8~6.0；

在所述步骤（3）中反应器间歇浸没频率为：浸没时间1~8min，间隔时间4~16h。

2.根据权利要求1所述一种黄芪种苗的培养方法，其特征在于：在所述步骤（1）中的黄芪组培苗为利用固体培养方式培养获得的黄芪组培苗，所述固体培养的培养基配方为：MS+IBA0.05~0.07mg/L+6-BA0.3~0.6 mg/L+蔗糖30g/L pH5.8~6.0，培养时间为10~15天。

3.根据权利要求1所述一种黄芪种苗的培养方法，其特征在于：在所述步骤（3）中的换液方法是：在无菌工作台中，打开反应器罐体的盖子，将旧的液体培养基倒出，将新的促进黄芪组培苗生根的液体培养基倒入反应器罐体中，再将反应器罐体密封，所述新的液体培养基盛放于三角瓶中，并经过高温高压湿热灭菌后冷却。

4.根据权利要求1所述一种黄芪种苗的培养方法，其特征在于：所述培养室中的环境为光照强度：1800~2000 lux，光照周期：14h/d，温度：22±1℃。