[发明专利]一种胃蛋白酶测定试剂盒及测定方法

说明书

本发明公开了一种胃蛋白酶测定试剂盒及测定方法，该试剂盒包括试纸条和反应液；所述试纸条包括本体，该本体包括背衬底板，该背衬底板上设有样品结合垫、硝酸纤维素膜和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸纤维素膜的两端上；该硝酸纤维素膜上设有检测线，该检测线包被有抗胃蛋白酶底物的单克隆抗体；所述反应液含有经标记的胃蛋白酶底物。本发明利用胃蛋白酶消化蛋白质的特性使底物失去反应原性的特点，通过检测被胃蛋白酶消化后剩余的具有反应原性的底物的量来间接定性和/或定量检测胃蛋白酶，具有灵敏度好、精密度高、易于操作的特点。

技术领域

本发明属于胃蛋白酶检测技术领域，具体涉及一种胃蛋白酶测定试剂盒及测定方法。

背景技术

胃食管反流是指胃液等胃内容物反流至食管、咽喉乃至口腔的疾病，常引起烧心、胸痛、咽异物感、咳嗽等症状，并可由于胃液中的胃蛋白酶破坏食管、咽喉、气道黏膜，损害细胞间或细胞膜上的蛋白，引起一系列并发症，是常见的消化科疾病之一。近年来逐渐认为唾液中的胃蛋白酶检测对胃食管反流有一定的诊断参考价值，但ELISA等胃蛋白酶检测方法操作繁琐，检测时间长。因此，建立一种能够快速检测胃蛋白酶的检测手段对于辅助诊断胃食管反流具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种胃蛋白酶测定试剂盒及测定方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：

一种胃蛋白酶测定试剂盒，包括试纸条和反应液；所述试纸条包括本体，该本体包括背衬底板，该背衬底板上设有样品结合垫、硝酸纤维素膜和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸纤维素膜的两端上；该硝酸纤维素膜上设有检测线，该检测线包被有抗胃蛋白酶底物的单克隆抗体；所述反应液含有经标记的胃蛋白酶底物。标本中胃蛋白酶消化底物后，该被消化的底物无法与抗体进行结合，即无法被检测线所捕获，即检测线的有色标记或荧光标记则减少。

一实施例中：所述胃蛋白酶底物为合成肽。

一实施例中：所述经标记的胃蛋白酶底物的标记物为有色标记或荧光标记，例如标记荧光素、胶体金、量子点、有色乳胶颗粒或荧光乳胶颗粒。

一实施例中：所述样品结合垫上含有胃蛋白酶抑制剂和pH缓冲液，用于终止胃蛋白酶催化反应及调整pH值至适合抗原抗体反应的范围。

一实施例中：还包括能够终止胃蛋白酶催化反应及调整pH值至适合抗原抗体反应的范围的终止液。

一实施例中：所述试纸条还包括壳体，所述本体设在壳体内；所述壳体上在对应样品结合垫的位置开设有加样孔；所述壳体上在对应检测线的位置开设有观察窗。

一实施例中：还包括试剂瓶，该试剂瓶内盛装有所述反应液。

一实施例中：还包括盒体，所述试纸条和试剂瓶位于盒体内。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：

一种胃蛋白酶测定方法，包括：

1)将待测样本与反应液反应，该反应液含有经标记的胃蛋白酶底物；

2)将步骤1)的产物终止消化，剩余的经标记的胃蛋白酶底物与抗胃蛋白酶底物的单克隆抗体反应，生成经标记的底物-抗体复合物；

3)检测经标记的底物-抗体复合物的量，从而对待测样本中的胃蛋白酶进行间接定性和/或定量检测。

一实施例中：应用上述的试剂盒的胃蛋白酶测定方法，包括：

1)将待测样本与所述反应液反应；