[发明专利]一种磺胺喹恶啉的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体是一种食品中磺胺喹恶啉的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

磺胺喹恶啉，属于磺胺类抗菌药物，其结构为：

磺胺喹恶啉属于磺胺类抗菌药物，是抗球虫的专用磺胺药，广泛应用于畜禽球虫病。由于磺胺类药的基本结构与对氨苯甲酸(PABA)相似，因而可互相争夺二氢叶酸合成酶，而影响二氢叶酸形成，最终影响核蛋白合成，从而抑制细菌和球虫的生长繁殖。磺胺喹恶啉口服后可迅速吸收，但排泄较为缓慢，致使其在组织器官和鸡蛋中残留时间很长，人食用后，可导致多种细菌对其产生耐药性，且可能有潜在的致癌性。此外，该类型的化合物的成本较低，价格便宜，在畜牧生产中不合理使用现象严重，因此，其在动物性食品中残留引起人类健康危害的潜在威胁已受到各国普遍关注，英、美等国家对磺胺类药物在肉类及乳制品中的允许残留量限制为100 μg/kg；欧盟第675/92号令中规定，在肉类及牛奶中磺胺类抗菌药物的最大残留量不得超过100 μg/kg；日本要求的最高残限制量更为严格，单个磺胺类药物残留限制量为20 μg/kg，最大残留总量不得超过100 μg/kg；而我国对磺胺类药物在肉类及乳制品中的允许残留量限制为100 μg/kg。

目前，检测磺胺喹恶啉的方法有高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法、量子点荧光免疫法、酶联免疫吸附法、胶体金法等。其中，液相色谱分析法缺乏高灵敏的检测器，仪器价格昂贵，操作繁琐，前处理复杂，耗时长。酶联免疫方法，采用辣根过氧化酶或碱性磷酸标记物，其酶标记物易失活，显色底物见光易分解，灵敏度低，对结构类似的化合物具有一定的交叉反应，造成测试结果不准确。

CN 106501200A（2017.03）公开了一种检测七种磺胺类药物的试剂盒，该试剂盒采用酶标二抗，TEM底物显色，其缺点主要是检测过程中分离游离物与结合物时，需要多步洗板，耗时耗力；并且其主要是借助酶催化TEM底物显色，反应时间、酸碱度、消毒液等都会对酶活力存在较大影响，造成试剂稳定性差。CN 101144819A（2008.03）采用胶体金法检测磺胺喹恶啉的残留量，其试剂盒最后检测结果是以肉眼可见的颜色进行表征，误差较大，并且操作繁锁，流程较多，更易出现误差，并且其灵敏度低。

CN 101936984 A（2011.01）公开了一种检测磺胺类化合物的量子点荧光免疫试剂盒，该试剂盒稳定性受环境条件（pH、离子强度、温度等），尤其是pH的影响较大，导致测试结果不准确，并且其具有成本高、周期长的缺点。而本公司开发的一种磺胺喹恶啉化学发光试剂盒，采用吖啶酯作为标记物，具有检测稳定、测量快速、灵敏度高的优点。

化学发光方法较其他方法的优点在于检测的简单性。

该体系采用磁分离体系，吖啶酯标记的化学发光技术进行检测的优点是：吖啶酯作为发光剂不需催化剂的存在，在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光；吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，可提高系统整体灵敏度，反应迅速；背景低、信噪比高，是一类有效的化学发光标记物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定、检测速度快、具有较高灵敏度和特异性的免疫磁微粒化学发光检测方法，为食品中检测磺胺喹恶啉提供便利。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

在反应杯中加入一定量的待测样本，然后加入磁颗粒偶联悬浮液和吖啶酯标记物， 混匀，于37℃孵育数分钟，最后分离、洗涤，加入化学发光预激发液A和激发液B，测定相应的发光强度，对照磺胺喹恶啉检测标准曲线，获得待测样中的磺胺喹恶啉的浓度。

本发明中的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

本发明中的吖啶酯标记物包含：吖啶酯标记的是磺胺喹恶啉抗原或抗体，其中吖啶酯溶液的浓度范围为2-85 mmol/L，其优选浓度为6.5 mmol/L。

本发明中缓冲液是pH 4.5-6.5，浓度为0.1 mol/L，经过0.22 μm滤器过滤的MES缓冲液。

本发明中所述的磺胺喹恶啉系列校准品浓度分别为：0 μg/L、0.02 μg/L、0.1 μg/L、0.5 μg/L、2.5 μg/L、12.5 μg/L，其缓冲液是含有0.5-5.0% BSA和0.1-0.5% PC300的Tris-HCl。