[发明专利]检测甜菜雄蕊育性的SSR分子标记及其应用

说明书

检测甜菜雄蕊育性的SSR分子标记及其应用，涉及一种检测甜菜雄蕊育性的SSR分子标记及其应用。本发明是要解决现有缺乏甜菜雄蕊育性相关的分子标记，不易于鉴定甜菜雄蕊育性的问题。用于PCR扩增该分子标记的引物对为BvRE051‑S和BvRE051‑A。该SSR分子标记用于鉴定甜菜雄蕊育性。本发明的SSR分子标记检测结果与甜菜雄蕊育性性状表现的一致性达70％，在可育与不育个体中分别达63.33％和76.67％。表明标记与雄蕊育性有连锁关系，可用于雄蕊育性的检测。本发明用于甜菜雄蕊育性检测。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，涉及一种检测甜菜雄蕊育性的SSR分子标记及其应用。

背景技术

甜菜(Beta Vulgaris)具有风媒与虫媒双重授粉途径，非常容易发生杂交，因此，鉴定雄蕊的育性，获得雄性不育种质，对甜菜的杂交育种非常重要，以雄性不育系为母本进行杂交，可保证杂交结果的准确性，同时节约劳动量、提高成功率。然而，甜菜雄性不育系及相应的保持系的获取费时费力且种质资源缺乏。我国的雄性不育材料主要来源于5个途径：国外引进、自然突变的雄性不育植株、杂种后代分离、化学诱变及物理诱变。

随着雄性不育种质的获取，雄性不育的遗传机理也在研究中。雄性不育按形成原因分为2种类型：细胞核型雄性不育与质核互作型雄性不育(也称细胞质型雄性不育)。在应用中，质核互作型雄性不育通过与保持系配套，理论上更易于操作。而对甜菜而言，不育系与保持系的种质仍比较缺乏，而且目前鉴定雄蕊育性的方法仍然以经典的形态学观察为主，难度大，效率低，且受到植株生长阶段的限制，甜菜大都是二年生的生长习性，育性鉴定工作量大、周期长。

Owen和Bliss相继提出了甜菜质核互作型雄性不育的遗传机制假说，认为甜菜的细胞质与细胞核内均有控制育性的等位基因，不同等位基因的存在和互作影响着甜菜雄蕊的育性，并存在着不同程度的影响，使甜菜出现可育、不育、半可育、半不育等不同类型。然而这些控制育性的编码基因至今未被鉴定出来，分子机制尚不明确。

在性状检测周期长、难度大、控制性状的分子机制未知的情况下，分子标记对甜菜育性的研究有着双方面的重要作用：一方面是可以直接作为工具，用于甜菜育性的预测，通过分子标记辅助选择来提高结果准确性并减少工作量；另一方面是作为序列信息和起始材料，通过基因组步移等方法进行育性相关基因的挖掘。

目前甜菜中已开发的与育性相关的分子标记非常少，大部分研究围绕一个等位基因座位Rf1展开，且研究侧重于对已有不育系、保持系的遗传机制研究，对育性鉴定的辅助作用非常有限。因此，自主开发育性相关的分子标记，有利于我国甜菜雄性不育种质的开发与利用。

发明内容

本发明是要解决现有缺乏甜菜雄蕊育性相关的分子标记，不易于鉴定甜菜雄蕊育性的问题，提供一种检测甜菜雄蕊育性的SSR分子标记及其应用。

本发明利用高通量测序技术开发了简单序列重复(simple sequence repeat,SSR)候选标记，利用F₂分离群体从中筛选出了与甜菜雄蕊育性相关的SSR分子标记BvRE051，获得了标记扩增区域的序列并进行了基因组定位。该分子标记可用于检测甜菜雄性不育个体。

本发明检测甜菜雄蕊育性的SSR分子标记，用于PCR扩增该分子标记的引物对为BvRE051-S和BvRE051-A，具体序列为：

BvRE051-S：5'-TCCAACTTTGGGACTCTAAATTAAC-3'

BvRE051-A：5'-GAAAGTGACGGCGAGAATGT-3'。

上述检测甜菜雄蕊育性的SSR分子标记的应用，它用于鉴定甜菜雄蕊育性。

具体鉴定方法为：

一、从甜菜幼嫩叶片中分离提取总DNA，若叶片的获取有困难，也可以用其它部位代替；