[发明专利]一种穗冠花外植体培植方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物培植领域，特别涉及一种外植体培植方法。

背景技术

花青素又叫花色素，是黄酮类化合物。作为最著名的天然色素，它广泛地存在于植物界，是植物体内的一种水溶性色素。由于每种花青素的分子结构或理化性质不同而呈现出不同的颜色，当与不同的金属离子结合后就形成五彩缤纷的配位化合物，令人赏心悦目。可是由于对天然色素的性质及在色彩、稳定性、着色力、价格等方面不如合成色素优越，因此，20世纪50年代后，天然色素使用量逐渐减少，而合成色素利用量日益增加。然而合成色素本身不仅无营养价值，而且近二十年来毒理学、生物学试验证实，合成色素都具有不同程度毒性，有些甚至致癌。因而从自然界中寻找一种安全的合成色素的替代品就得到各国的重视。

在自然界中几乎所有的黄酮类化合物都可以用作色素，可是多数并不实用。经过多年的实验证明花青素对于人的健康很有利，所以一直以来它就成了人们研究、开发和利用的最重要的天然色素之一。在自然界含有花青素的食用色素有：杜鹃花科的越桔红色素，锦葵科玫瑰茄红色素，葡萄科葡萄皮色素，忍冬科蓝锭果红色素，蔷薇科火棘红色素，唇形科紫苏色素等等。花青素除了可以满足食用外，其药用价值也很高，黄酮类化合物是许多药用植物的主要活性成分之一，如：紫草色素。它具有抗炎，杀菌、抗肿瘤、抗病毒、保肝和保护心血管系统等等的作用。总之花青素既可以用作食品、化妆品、药品的着色剂，也可以入药，用于治疗多种疾病。

但是实际生产应用的花青素类色素主要是直接从植物组织中提取的，其来源和生产时间都受到很大的限制。所以利用组织培养生产花青素有着潜在的重大意义。用组织培养技术生产花青素的研究开始于20世纪50年代。用这项技术的好处在于：1、不会产生运输和贮藏损失；2、愈伤组织的生产和分化可以精确的控制，免去了受天然条件和野外生产多种不利因素的制约；3、合成的方向性强，尤其是能获得次生代谢物较高产量；4、组织培养技术含量高，生产成本低。要获得大量花青素必须进行大批量的工业化液体培养，然而在进行大批量工业化液体培养的一个至关重要的前提是有新鲜的活力旺盛的，一定量的愈伤组织。随着植物组织培养技术在各个领域的研究迅速发展并日益完善，人们对组培中外植体生长、分化的规律性探索逐步深化，卓有成效地进行了各方面的植物组培工作。其中，外植体培植方法对植物愈伤组织的诱导率、生长状况和其花青素积累情况尤为重要。现仍未有一种理想的针对穗冠花外植体的培植方法。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种穗冠花外植体培植方法，其能大大提高穗冠花愈伤组织的诱导率及花青素积累量，同时培植出的愈伤组织具有良好的生长状况。

本发明所采取的技术方案是：一种穗冠花外植体培植方法，其包括如下步骤：

1)将穗冠花种子浸入0.1％的升汞溶液中消毒12min后，无菌水冲洗5次，然后在超净工作台上、酒精灯旁，将种子接入萌发培养基中，所述萌发培养基中含有质量百分比为3％的蔗糖和0.6％的琼脂；

2)将步骤1)接种后的萌发培养基置于温度为25～28℃、光照强度为1200～1500lx、光照时间为14h/d的条件下培养10天，得穗冠花无菌苗；

3)将步骤2)所得穗冠花无菌苗放在超净工作台上、酒精灯旁，切除根和叶后，将下胚轴平均切成0.8～1.2mm的外植体小段后，接种到诱导培养基中，所述诱导培养基中添加有由浓度为0.1mg/L的2,4-D和浓度为0.5mg/L的BA复配而成的复合生长调节剂；

4)将步骤3)的诱导培养基置于温度为25～28℃、光照强度为1200～1500lx、光照时间为14h/d的条件下培养10天，得穗冠花愈伤组织。

作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述萌发培养基为MS基本培养基或1/2MS基本培养基。

作为上述方案的进一步改进，步骤3)中所述诱导培养基为MS基本培养基或B5基本培养基。

作为上述方案的进一步改进，所述萌发培养基和诱导培养基的pH值均为5.8。

作为上述方案的进一步改进，步骤3)中所述诱导培养基中含有质量百分比为3％的蔗糖和0.6％的琼脂。

本发明的有益效果是：本发明通过确定培植过程中从穗冠花种子萌发到外植体愈伤组织诱导的最佳培植条件，使得培植出的穗冠花外植体诱导率高，愈伤组织生长量大，同时愈伤组织花青素含量大。本发明适用于穗冠花愈伤组织及其花青素的量产。

具体实施方式