[发明专利]一种大鼠肾小球系膜细胞分离及培养方法在审
| 申请号： | 201710711746.7 | 申请日： | 2017-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN109402042A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肾小球系膜细胞 大鼠 完全培养基 细胞免疫荧光 筛网过滤 细胞沉淀 研磨 混合酶 活性高 培养瓶 肾皮质 组织块 灌洗 剪碎 筛网 双抗 预冷 重悬 肾脏 接种 清洗 消化 | ||
【权利要求书】：
1.一种大鼠肾小球系膜细胞分离及培养方法，包括步骤：（a）含双抗预冷PBS灌洗肾脏；（b）分离肾皮质，剪碎并于重叠筛网上进行研磨，收集筛网上的组织块，清洗数次；（c）混合酶消化，筛网过滤，收集滤液离心；（d）完全培养基重悬细胞沉淀，接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶中；（e）培养数天后更换混合完全培养基继续培养；（f）细胞免疫荧光鉴定分离的肾小球系膜细胞。
2.根据权利要求1所述的大鼠肾小球系膜细胞分离及培养方法，其特征在于，所述的大鼠为体重150+30g的正常SD大鼠。
3.根据权利要求1所述的大鼠肾小球系膜细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤b中重叠筛网为孔径分别为80目、100目和200目的不锈钢筛网。
4.根据权利要求1所述的大鼠肾小球系膜细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤c中混合酶为0.05-0.1%IV胶原酶和0.05-0.1%I型胶原酶，消化时间为15-30min。
5.根据权利要求1所述的大鼠肾小球系膜细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤d的多聚赖氨酸浓度为0.1-0.25mg/ml。
6.根据权利要求1所述的大鼠肾小球系膜细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤d的完全培养基为含15%FCS和5%FBS的DMEM培养液。
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