[发明专利]检测TSC1和TSC2基因启动子甲基化水平的成套试剂与方法

说明书

本发明公开了检测TSC1和TSC2基因启动子甲基化水平的成套试剂与方法。本发明公开的检测TSC1和TSC2基因启动子甲基化水平的成套试剂由序列表中序列1‑38所示的单链DNA组成。本发明的成套试剂可对TSC1基因以及TSC2基因启动子全2000bp区域甲基化水平进行检测，覆盖了全2000bp区域的所有CpG位点，不仅可以对区域甲基化水平进行统计，同时还可以对所在区域的单个位点进行分析与统计，具有精准度高、检测通量高等优点，可用于结节性硬化症的检测和发现、新药筛选与研制、治疗与效果的评价。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，检测TSC1和TSC2基因启动子甲基化水平的成套试剂与方法。

背景技术

结节性硬化症(TSC)又称Bourneville病，是一种常染色体显性遗传的神经皮肤综合征，也有散发病例，多由外胚叶组织的器官发育异常，可出现脑、皮肤、周围神经、肾等多器官受累，临床特征是面部皮脂腺瘤、癫痫发作和智能减退。该病为遗传病，根据基因定位可分为四型：TSC1、TSC2、TSC3、TSC4。TSC1和TSC2突变分别引起错构瘤蛋白和结节蛋白功能异常，影响其细胞分化调节功能，从而导致外胚层、中胚层和内胚层细胞生长和分化的异常。

TSC1和TSC2蛋白参与调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)激酶活性，因此考虑应用雷帕霉素治疗TSC。雷帕霉素属于大环内酯类抗生素，因抑制mTOR活性、参与调节细胞生长用于抗真菌治疗，在器官移植术后也作为免疫调节药物应用。

癌症是目前严重危害人类健康和生命的疾病，患病人群逐年递增，存活率低，难以治疗。TSC1与TSC2为肿瘤抑制因子，TSC1和TSC2的失活突变，就会导致相似的癌症症状，导致癌症的发生。

关于TSC1和TSC2启动子甲基化的检测一直都局限于蛋白质印记(WesternBlotting)，实时定量PCR的方法进行检测，或是CpG岛单个或多个位点甲基化检测，这些检测方法能够准确检测到TSC1蛋白与TSC2蛋白的表达水平，但是存在对仪器的精密度程度要求较高，检测时间较长等问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测TSC1和TSC2基因启动子甲基化水平。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了检测或辅助检测TSC1基因启动子和TSC2基因启动子甲基化水平的成套试剂，所述成套试剂名称为成套试剂TSC1-TSC2，由检测TSC1基因启动子甲基化水平的成套试剂(成套试剂TSC1)和检测TSC2基因启动子甲基化水平的成套试剂(成套试剂TSC2)组成；

所述成套试剂TSC1由名称分别为TSC1-1、TSC1-2、TSC1-3、TSC1-4、TSC1-5、TSC1-6、TSC1-7、TSC1-8和TSC1-9的引物对组成；

所述TSC1-1由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；

所述TSC1-2由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；

所述TSC1-3由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；

所述TSC1-4由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；

所述TSC1-5由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成；

所述TSC1-6由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA组成；

所述TSC1-7由序列表中序列13和序列14所示的两条单链DNA组成；

所述TSC1-8由序列表中序列15和序列16所示的两条单链DNA组成；

所述TSC1-9由序列表中序列17和序列18所示的两条单链DNA组成；