[发明专利]一种检测肺表面活性蛋白A的核酸适配体液晶生物传感器及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种检测肺表面活性蛋白A的核酸适配体液晶生物传感器，其特征在于所述的液晶生物传感器含有肺表面活性蛋白A核酸适配体。

2.根据权利要求1所述的检测肺表面活性蛋白A的核酸适配体液晶生物传感器，其特征在于所述肺表面活性蛋白A核酸适配体的序列为5'-NH₂-(CH₂)₆-TGTACGCCTACTGTGTGT-3' ，且在5'端修饰了氨基。

3.一种检测肺表面活性蛋白A的核酸适配体液晶生物传感器的制备及检测方法，其特征在于，包括以下步骤，

步骤一：玻片的清洗与处理

玻片处理用以去除玻璃表面的灰尘和有机物，同时使表面羟基化,将载玻片切割成尺寸为2 cm×2 cm后放入大烧杯中，往烧杯中倒入浓H₂SO₄，再倒入双氧水溶液，其中浓H₂SO₄和双氧水体积比为7:3，将烧杯置于80 ℃水浴锅中温育1小时，取出后用无水乙醇和去离子水依次清洗5至6次，氮气吹干置于110 ℃烘箱中干燥2-3小时，防尘保存；

步骤二：传感器基底的组装

上玻片：上玻片用DMOAP水溶液组装

将处理的玻片浸入含体积比为0.35% DMOAP的水溶液中，常温下静置反应30min，用大量超纯水冲洗，氮气吹干，于110℃烘箱干燥1小时；

下玻片：下玻片用DMOAP和APTES混合溶液组装

将处理的玻片浸入含体积比为3% APTES和体积比为0.3% DMOAP的无水乙醇溶液中，80℃水浴加热2小时，用大量超纯水冲洗，氮气吹干，于110℃烘箱干燥1小时，备用；

下玻片进行GA组装

将用DMOAP和APTES修饰后的下玻片浸入体积分数为2%的GA水溶液中常温下浸泡1h，使玻片表面醛基化，取出用大量去离子水冲洗，氮气吹干，作为下玻片防尘备用；

步骤三：清洗溶液的制备和核酸适配体缓冲溶液的制备

核酸适配体缓冲溶液的制备：配制含有10m mol·L^-1的NaCl和10m mol·L^-1的MgCl₂的pH=7.4的Tris-HCl溶液作为用于稀释核酸适配体的缓冲溶液；

清洗溶液的制备：配制含有体积比为0.01%SDS的2×SSC溶液，用NaOH定容至pH=7.0；

步骤四：肺表面活性蛋白A核酸适配体的固定

将200 μL的100nmol·L^-1的核酸适配体Aptamer溶液滴加到步骤二中的下玻片上，37℃反应2h，用含有步骤三中的清洗溶液和超纯水冲洗，去除多余的核酸适配体分子，然后用氮气吹干，然后再用80mmol·L^-1的甘氨酸溶液室温下封闭玻片上未反应的醛基1h，用超纯水冲洗，氮气吹干，以去除传感器的非特异性干扰；

步骤五：基于核酸适配体的液晶传感器的制作

首先用移液枪吸取200μL 不同梯度浓度的SP-A溶液滴到载玻片上与步骤四中已经修饰在玻片上的肺表面活性蛋白A的核酸适配体在室温下反应1h,然后分别用pH=7的0.01mol·L^-1的PBS溶液和大量的超纯水冲洗,小流量氮气吹干，随后,液晶5CB被加热到各向同性的液态，然后装配进步骤二中由DMOAP修饰的上玻片和SP-A修饰的下玻片，中间放置用于控制液晶厚度的干净的铜载网于液晶盒中,液晶充满整个铜载网，液晶盒冷却至室温，然后用三个小长尾夹夹在一起制成液晶盒；

步骤六：样品检测

将步骤五中检测样品的液晶盒置于偏光显微镜下，通过安装在显微镜筒上的数码相机获取图像。