[发明专利]低内毒素胶原蛋白的制备方法

说明书

本发明揭露一种低内毒素胶原蛋白的制备方法。所述制备方法包含以下步骤：提供动物皮肤；去除动物皮肤的残余脂肪组织及肌肉组织；以碱性溶液膨胀动物皮肤；刨除动物皮肤的上下表面；以含有水解酶的溶液水解动物皮肤；以盐类溶液析出低内毒素胶原蛋白；以及以醇类溶液清洗低内毒素胶原蛋白。

技术领域

本发明有关于一种胶原蛋白的制备方法，特别是有关于一种低内毒素胶原蛋白的制备方法。

背景技术

内毒素为格兰阴氏菌细胞壁表面的一种成分，其被称为脂多糖(lipopolysaccharide)，只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才会被释放出来。脂多糖分子由特异性多糖、核心多糖和脂质A三部分构成。脂质A是内毒素的主要毒性组分。不同的革兰氏阴性细菌的脂质A结构基本相似。因此，凡是由革兰氏阴性菌引起的感染，虽菌种不一，各菌的内毒素性效应大致相同。其主要会在人体内引起发热、白细胞增多、微循环障碍、休克等临床症状。

在医疗级胶原蛋白的产业中，内毒素的含量即决定了胶原蛋白的质量及应用层次，也即决定了医疗级胶原蛋白是否可做为植入医疗器械的使用范围。

一般而言，在胶原蛋白材料上的内毒素，主要来自于动物组织上残留的微生物、吸附于动物皮肤组织表面的内毒素、以及制程中微生物污染所产生的内毒素等。内毒素在与蛋白质或其它成份吸附后，其脱附的条件相当不容易。传统上常用干热灭菌法(dry heatsterilization)来去除耐热性材料的内毒素，其主要是将要去除内毒素的物品曝露于250℃的环境2小时，来进行内毒素的去除；但遇高温会产生热分解反应的热稳定性不佳的材料，无法以上述方法来进行内毒素的去除。因此，如胶原蛋白等生物高分子常用透析法来移除胶原蛋白溶液内的内毒素。透析法的最大困难在于透析的过程中，胶原蛋白溶液的黏度不能过高，因此在透析前，必需要将被透析溶液进行高倍率的稀释，而在完成透析后再做浓缩程序，以提高溶液的浓度。此透析程序不但非常耗时、耗能又耗料，也大大降低了低内毒素胶原蛋白的产能，因而使得生产的成本倍数的增加。

发明内容

鉴于上述公知技术的问题，本发明的目的就是在提供一种利用物理与化学手段来生产低内毒素胶原蛋白的方法。

根据本发明的一个目的，提出一种低内毒素胶原蛋白的制备方法，其包含以下步骤：提供动物皮肤、将动物皮肤的残余脂肪组织及肌肉组织去除、以碱性溶液或缓冲溶液膨胀动物皮肤、刨除动物皮肤的上下表面、以含有水解酶的溶液水解动物皮肤、以盐类溶液析出低内毒素胶原蛋白、以及以醇类溶液清洗低内毒素胶原蛋白。

优选地，刨除动物皮肤的步骤刨除动物皮肤的上下表面约0.2mm至约0.5mm。

优选地，水解酶可选自于胃蛋白酶(pepsin)、胶原蛋白水解酶(collagenase)、胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)、胜肽酶(peptidase)、蛋白酶A(proteinase A)、蛋白酶K(proteinase K)、胰蛋白酶(trypsin)、微生物蛋白酶(microbial proteases)、木瓜蛋白酵素(papain)及其任意组合。

优选地，盐类溶液可选自于碱金属磷酸盐溶液、碱金属卤化物溶液及其任意组合。

优选地，醇类溶液可包含乙醇、异丙醇或其组合。

优选地，在去除步骤、水解步骤、盐析步骤及醇洗步骤中使用微生物生长抑制溶液。

优选地，微生物生长抑制溶液可选自于醇类溶液、酸性溶液、碱性溶液、高渗透压溶液及其任意组合。

优选地，刨除动物皮肤的步骤在常温下进行。

优选地，膨胀动物皮肤的步骤将该动物皮肤膨胀至1.2倍至2.1倍的范围内。

优选地，碱液或缓冲溶液的pH值在11～13.5的范围内。