[发明专利]一种同管检测α及β珠蛋白基因序列的试剂盒

说明书

本发明公开了一种同管检测α及β珠蛋白基因序列的试剂盒，包括扩增引物，以及用于识别α珠蛋白基因序列‑SEA、‑α^3.7、‑α^4.2位点缺失、α珠蛋白基因序列CD30、CD31、CD59、WM、QS、CS位点突变和β珠蛋白基因序列‑82、‑80、‑79、‑78、Cap+1、Cap40‑43、Int、CDs14/15、CD17、CD19、CD26、CDs27/28、CD30、IVSⅠ‑1、CD31、CD37、CDs41/42、CD43、CDs71/72、CD95、IVSⅡ‑5、IVSⅡ‑654位点突变的探针。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种同管检测α及β珠蛋白基因序列的试剂盒。

背景技术

地中海贫血(thalassemia，简称地贫)是一类由于珠蛋白链合成不平衡造成的单基因遗传溶血性疾病。该种疾病最早发现于地中海沿岸民族，是全球范围内最常见的、对人类健康影响最大的血液遗传病之一。正常成人血红蛋白中的珠蛋白由4条肽链组成，即α、β、γ、δ链，每条链都有对应的基因编码，这些基因的点突变、缺失或插入都会不同程度的造成各肽链的合成障碍，导致血红蛋白组分改变，从而发生贫血。

通常地中海贫血被划分为α、β、δβ和δ四种类型，其中α和β地中海贫血最为常见。流行病学调查显示，该种疾病在地中海地区、非洲、亚洲、南太平洋等大洲的热带、亚热带地区为高发病率区域。在我国则以广东、广西、海南、云南、香港为高发区，福建、贵州、四川、湖北、湖南、台湾等地也较为常见，而北方则少见。以广东省为例α地中海贫血基因携带率约为8.5％，β地中海贫血携带率约为3.6％，做好地中海贫血基因检测不光可以明确病因，为患者制定更有针对性的治疗方案；更重要的是可以指导携带者的优生优育，避免或降低新生儿患者或携带者的比例，为社会安定和百姓幸福贡献一份力量。

α地中海贫血即α珠蛋白生成障碍性贫血，是由于α珠蛋白基因突变导致α珠蛋白合成缺陷所引起的。α地中海贫血表现型呈明显的遗传异质性，根据临床变现可分为四种临床类型，即Hb Bart’s胎儿水肿综合征、HbH病、轻型α地贫、静止型α地贫。

β地中海贫血的发生主要是由于基因的点突变，极少数为基因缺失导致β珠蛋白链的合成减少或完全缺乏。β地贫也呈明显的遗传异质性，人群中β地贫致病基因的携带率可达3.36％～6.00％，且致病的分子病理相当复杂，已知有170种左右的β珠蛋白基因突变可致病。国内最常见的突变有6种：CDs41/42(-TCTT)约占45％；IVSⅡ-654(CT)约占24％；CD17(AT)约占14％；-78(TATA盒-28)约占9％；CDs71/72(+A)约占2％；CD26(GA)即HbE26约占2％。

多年来地中海贫血症的检测方法在不断完善和更新，目前主要有常规的血液表型分析法以及新型的核酸检测法。核酸检测法主要涉及检测缺失型α地贫的Gap-PCR法；检测突变型α地贫及β地贫的PCR-反向点杂交法、微整列芯片法、荧光PCR溶解曲线法、以及金标准核酸测序法。这些方法虽各有优点，但是也有各自的制约。比如血液表型分析法是目前的一线筛查指标，涉及MCV、MCH、MCHC、HGB、HbA2、HbF等十多项检测项目。分析各项数值可初步判断不同类型的地中海贫血症。虽然易于快速推广，但是静止型地中海贫血症基因的携带者是无法通过血液表型分析被检测到的；另外某些指标相似的血液病(如缺铁性贫血)也容易被误诊为地中海贫血。

PCR-反向点杂交法是将特异性探针分别固定到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，再将PCR特异性扩增的产物与之杂交，这样待检样本就会与膜上相应的同源序列探针相结合，洗涤去除未结合的扩增产物，由于扩增产物包含有生物素类的标记物，结合了扩增产物的探针也将带有生物素类的标记物，再经相应的显色反应就能显出杂交信号，读出检测结果。这种方法仪器设备简单，但是检测时间长，检测灵敏度低，而且操作繁琐，不适用于大样本量的检测。