[发明专利]植物组成型表达启动子及其应用

说明书

本发明公开了一种表达目的基因的方法及其专用特异DNA分子。本发明所提供的特异DNA分子，其核苷酸序列如序列表中序列1自5’末端起第7至589位所示。实验证明，本发明提供的特异DNA分子可以在水稻、玉米和拟南芥的各个组织中启动目的基因(如mCry1Ab基因，其核苷酸序列如序列表中序列2自5’末端起第7至1881位所示)的表达，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及植物分子生物学领域，具体涉及植物组成型表达启动子及其应用。

背景技术

在转基因植物产品研发过程中，需要通过转基因技术以高水平表达蛋白产物。对植物进行操作以改变或改善表型特征(如对生物或非生物胁迫抗性、产量提升、品质改良等)需要在植物组织中表达特定基因。该基因操作由于以下两个发现已经成为可能，即将异源遗传物质转化进植物细胞的能力，以及存在能够驱动异源遗传物质表达的启动子。

启动子是重要的顺式作用元件，调控基因的转录，根据启动子的转录模式不同将其分为组成型、诱导型和组织特异性启动子三类。目前，应用较为广泛的为组成型启动子，常用于过表达特定的基因。

最常用的启动子包括花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子(Odelletal，Nature313：810-812(1985))、胭脂碱合酶(NOS)启动子(Ebertetal，PNAS.84:5745-5749(1987))、Adh启动子(Walkeretal，PNAS.84:6624-6628(1987))、蔗糖合酶启动子(Yangetal，PNAS.87:4144-4148(1990))和玉米泛素启动子Ubiquitin(Cornejoetal，PlantMolBiol.23:567-581(1993))。识别和分离可用于植物中强烈表达特定基因的调控元件在转基因植物的商业品种开发中具有重要的作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何启动目的基因表达。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种特异DNA分子。

本发明所提供的特异DNA分子，可为如下a1)或a2)或a3)所示的DNA分子：

a1)核苷酸序列是序列表中序列1自5’末端起第7至589位所示的DNA分子；

a2)与a1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性的DNA分子；

a3)在严格条件下与a1)或a2)限定的核苷酸序列杂交的DNA分子。

含有所述特异DNA分子的表达盒也属于本发明的保护范围。

含有所述特异DNA分子的重组质粒也属于本发明的保护范围。所述重组质粒为将所述特异DNA分子插入出发质粒得到的重组质粒。

所述重组质粒具体可为重组质粒pCAMBIA3301-Gly。重组质粒pCAMBIA3301-Gly为将载体pCAMBIA3301的限制性内切酶HindⅢ和NcoI识别序列间的小片段替换为序列表中序列1自5′末端起第7至589位所示的DNA分子。

含有所述特异DNA分子的重组微生物也属于本发明的保护范围。

所述重组微生物可通过将所述重组质粒导入出发微生物得到。

所述出发微生物可为酵母、细菌、藻类或真菌。所述细菌可为革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。所述革兰氏阴性细菌可为根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)。所述根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)具体可为根癌农杆菌EHA105或根癌农杆菌GV3101。