[发明专利]一种基于DNA条形码技术的中药材苍术种苗鉴定方法

说明书

本发明公开了一种基于DNA条形码技术的中药材苍术种苗鉴定方法，该方法提供了中药材苍术及其易混伪品的标准ITS2条形码数据库，通过将待鉴定样品的ITS2序列与所述标准ITS2条形码数据库中的序列进行比对，以鉴别中药材苍术种苗真伪。本发明的方法能够快速有效的鉴别出苍术种苗及其易混伪品种苗，从源头保证中药材苍术生产的安全性。

技术领域

本发明涉及中药材鉴定方法，具体涉及一种基于DNA条形码技术的中药材苍术种苗鉴定方法。

背景技术

据2015版中国药典记载，苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北苍术Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根，英文版植物志(《Flora ofChina》)将茅苍术和北苍术修订为苍术Atractylodes lancea(Thunberg)Candolle。苍术辛、苦，温。归脾、胃、肝经。燥湿健脾，祛风散寒，明目。用于湿阻中焦，脘腹胀满，泄泻，水肿，脚气痿躄，风湿痹痛，风寒感冒，夜盲，眼目昏涩。苍术素等挥发油成分被认为是苍术的主要药理活性成分，现代药理研究表明苍术具有抑制胃酸分泌、抗心律失常、抑菌抗炎、降血糖、抗缺氧等作用。苍术是藿香正气水、如意金黄散、国公酒等知名中成药的重要成分，资源需求量大，野生药材已濒危和枯竭，栽培种植规模逐渐扩大，湖北、江苏、内蒙古、河北等地为其药材主产地。苍术栽培有种苗(分株繁殖、根茎繁殖)和种子繁殖两种方式，以种苗繁殖为主。近年来，随着苍术价格走高，苍术的栽培面积不断扩大，正品苍术种苗货源有限，苍术种苗掺假时有发生。

我国尚缺乏与农作物种子相类似的良种生产管理规范。2013年，国家食品药品监督管理总局等部门“关于进一步加强中药材管理的通知”中指出“统一建立种子种苗繁育基地”。但当前中药材种子种苗仍以自产自销为主，种子种苗质量参差不齐，特别是野生资源紧缺，市场价值高的中药材品种，已成为种子种苗掺伪的重灾区。近年来随着苍术价格持续走高，野生资源逐渐枯竭，但苍术“野生变家种”技术尚未完全成熟，北苍术自身种苗产量有限，野外采集的种苗不足以满足种植需求，相当数量种苗购自苍术栽培较久的东北地区，而东北苍术栽培物种以地方习惯用品关苍术和朝鲜苍术为主，导致了当前苍术种苗混乱的情况。

DNA条形码技术利用基因组中一段通用的标准短序列进行物种鉴定，不依赖鉴定对象的形态特征，不受鉴定对象生长发育阶段的影响，是近年来新兴的种子种苗鉴定方法，已应用于多种中药材种子种苗的鉴定研究。当前，多数中药材野生资源严重不足，中药材人工栽培种植是保障中药安全的重要途径。中药材种子种苗是中药材栽培种植的源头，如何保证中药材种子种苗基原物种正确是中药材生产的基本前提，中药材种子种苗鉴定错误必然会埋下中药材混伪品充斥市场的隐患。传统的中药材种子种苗鉴定方法以种子种苗形态特征为依据，借助放大镜、体式显微镜等工具识别种子种苗的微观特征，对鉴定者的专业知识要求极高，且易受中药材种子种苗成熟度、保存状态、群体差异影响，主观性较强。DNA条形码技术从中药材种子种苗的基因层面进行研究，通过比较DNA序列上的差异进行物种区分鉴定，不受样品形态特征限制，鉴定结果更加准确可靠。已完成的羌活、泽泻、重楼等中药材种子、种苗DNA条形码鉴定研究表明：DNA条形码技术对发现中药材种子种苗市场混伪品具有独特优势，为从源头保证中药材种子种苗的真实性，避免经济损失，保障中药材生产安全具有重要意义。

因此，本领域技术人员致力于开发一种基于DNA条形码技术的中药材苍术种苗鉴定方法及用于中药材苍术种苗鉴定的标准ITS2条形码数据库。

发明内容

传统上，中药材苍术(Atractylodis Rhizoma)种苗依赖种苗的外部形态和内部解剖特征进行鉴定，由于种苗为植物生长的起始阶段，尚缺乏花、果等形态分类学鉴定所需的典型特征，难以准确鉴定到物种。近年来由于鉴定失误引起的中药材苍术引种错误不仅带来了巨大的经济损失，也造成了潜在的临床用药安全风险。为了克服上述缺陷，本发明提供了一种基于DNA条形码技术的中药材苍术种苗鉴定方法，摆脱了传统鉴定方法依赖形态特征的障碍，鉴定客观、准确。