[发明专利]来源于木霉的脂肪酶基因及其相关产品与应用

说明书

本发明公开了来源于木霉的脂肪酶基因及其相关产品与应用。该脂肪酶基因是编码序列为序列2的第13‑1659位的TlLipA基因或编码序列为序列2的第1‑1659位的RTlLipA基因。TlLipA基因或RTlLipA基因表达的蛋白质具有脂肪酶活性，该蛋白质的脂肪酶的最适pH是9.5、最适温度是50℃，该蛋白质的脂肪酶活性可被表面活性剂Triton X100、Tween 20和SDS增强；该蛋白质在pH值6‑9的条件下脂肪酶活性稳定。TlLipA基因或RTlLipA基因表达的蛋白质是对表面活性剂具有强耐受性的碱性嗜温脂肪酶，可应用于洗涤行业。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中来源于木霉的脂肪酶基因及其相关产品与应用。

背景技术

脂肪酶(EC 3.1.1.3)被认为是最重要的商业酶之一，在快速增长的生物技术领域引起了极大的关注。脂肪酶可以在油和水的界面催化三酰基甘油水解，释放二酰基甘油酯，长链脂肪酸(10个碳)和甘油。在水解过程中，脂肪酶与底物酰基结合形成脂肪酶-酰基复合物，然后将酰基转移到水分子的羟基基团上从而实现水解。在非水溶条件下，脂肪酶可以将羧酸的酰基转移到亲核试剂。根据蛋白质结构的相似性，脂肪酶属于α/β水解酶家族，其中催化三联体(通常是丝氨酸，组氨酸和天冬氨酸或谷氨酸)和氧阴离子孔(即活性位点中的口袋)对催化至关重要，其盖子的结构决定了底物对催化位点的可接近性和可结合性。

微生物来源的脂肪酶广泛用于各领域，包括工业，食品，饲料，医疗。自20世纪60年代以来，加酶洗涤剂已被引入全球市场，能够有效去除甘油酯和脂肪酸的脂肪酶成为洗涤剂的主要添加剂之一。脂肪酶在工业和环境上的应用意义包括但不限于：脂肪酶为洗涤剂提供更强的去污力，特别是在低温和轻中度碱性洗涤环境下；具有低底物特异性的脂肪酶能够非常有效地去除顽固性污渍，例如血液或脂肪；脂肪酶不仅具有很高的生物降解能力，而且对水生生态系统无有害影响。然而，几个瓶颈限制了脂肪酶在洗涤剂中的应用，例如低底物特异性的脂肪酶很难获得，严格的洗涤条件(低温和碱性条件)以及脂肪酶对洗涤剂中化学物质的敏感性等等。前期研究表明来源于细菌和酵母的部分脂肪酶具有高温活性，如来自铜绿假单胞菌(嗜热芽孢杆菌)和酵母Kurtzmanomyces sp.的脂肪酶的最适温度为60-75℃，大大高于一般洗涤的温度(20-40℃)。虽然一些细菌来源的脂肪酶具有适碱性，但是在高于pH9.0的条件下酶活很低，大大降低了在洗涤剂中应用的可能。此外，脂肪酶对表面活性剂的敏感性也大大降低了其在洗涤剂中的应用。因此，获得对表面活性剂具有强耐受性的碱性中低温脂肪酶，在洗涤行业具有重大的应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何获得对表面活性剂具有强耐受性的碱性嗜温脂肪酶。

为了解决以上技术问题，本发明提供了下述DNA分子，所述DNA分子为TlLipA基因或RTlLipA基因；

所述TlLipA基因是如下T1)或T2)所示的DNA分子：

T1)编码序列为SEQ ID No.2的第13-1659位的DNA分子；

T2)与T1)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码氨基酸序列是SEQ IDNo.3的第5-552位氨基酸残基的蛋白质的DNA分子；

所述RTlLipA基因是如下R1)或R2)所示的DNA分子：

R1)编码序列为SEQ ID No.2的第1-1659位的DNA分子；

R2)与R1)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码氨基酸序列是SEQ IDNo.3的蛋白质的DNA分子。

上述DNA分子中，所述DNA分子可来源于Trichoderma lentiforme，如来源于Trichoderma lentiforme ACCC 30425。