[发明专利]一种测定人参皂苷RZ1原料或制剂中异构体杂质人参皂苷RK1的方法

说明书

本发明涉及一种测定人参皂苷RZ₁原料或制剂中异构体杂质人参皂苷RK₁的方法，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相添加有羧甲基‑β‑环糊精，色谱参数如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：由0.2％磷酸水溶液与甲醇按照体积比44:56混合而成，或由0.2％磷酸水溶液与乙腈按照体积比52:48混合而成，用三乙胺调节pH至7.2，还含有浓度为0.1g/L的羧甲基‑β‑环糊精，等度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：38‑42℃；检测波长：203nm。本发明提供的HPLC方法通过在流动相中添加异构体选择剂羧甲基‑β‑环糊精，仅使用等度洗脱就可以有效将人参皂苷RZ₁和人参皂苷RK₁分离，分离度高，方法学验证合格。

技术领域

本发明涉及药物分析，尤其涉及一种测定人参皂苷RZ₁原料或制剂中异构体杂质人参皂苷RK₁的方法。

背景技术

申请人研究发现人参皂苷RZ₁可有效促进骨髓间充质干细胞成骨分化。人参皂苷RZ₁最早由韩国学者Sang Myung LEE从加热炮制的人参中分离得到(参考文献：Ginsenosides from Heat Processed Ginseng,Chem Pharm Bull,2009)，生源上由人参皂苷RG₃脱水而得。

人参皂苷RZ₁有两个同分异构体，即人参皂苷RK₁和RG₅，三者化学结构式及生源降解途径如下所示：

人参皂苷RG₃的C20羟基与C21氢发生消除反应得到人参皂苷RK₁，人参皂苷RG₃的C20羟基与C22氢发生消除反应得到人参皂苷RG₅和RZ₁，人参皂苷RK₁与RG₅、RZ₁为双键位置异构，人参皂苷RG₅与RZ₁为双键顺反异构。

其中，人参皂苷RZ₁与人参皂苷RK₁在液相色谱的保留行为非常相似，极难分离。以上述人参皂苷RZ₁最早发现者Sang Myung LEE为例(参考文献：Ginsenosides from HeatProcessed Ginseng,Chem Pharm Bull,2009)，研究者采用了二维液相色谱才将人参皂苷RZ₁与人参皂苷RK₁分开。但是，本领域技术人员知道，二维液相色谱发展非常不成熟，重现性差，不能满足药物质量控制的严格要求。各国药典对二维液相色谱都非常慎重，目前仅有美国药典收载了个别极其难以分离的品种。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种测定人参皂苷RZ₁原料或制剂中异构体杂质人参皂苷RK₁的方法，以使用常规的一维液相色谱就实现人参皂苷RZ₁原料或制剂中异构体杂质人参皂苷RK₁的检测控制。

为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

一种测定人参皂苷RZ₁原料或制剂中异构体杂质人参皂苷RK₁的HPLC方法，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相添加有羧甲基-β-环糊精。

在一个具体实施例中，所述流动相为甲醇水溶液或乙腈水溶液，其中添加有适量浓度的羧甲基-β-环糊精。

在一个具体实施例中，HPLC色谱参数如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；