[发明专利]一种固定化单宁酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种固定化单宁酶，其特征在于，采用胺基型载体；

制备所述的固定化单宁酶的方法，具体步骤如下：

（1）胺基型载体的制备；

将单体和交联剂利用悬浮聚合法，制备环氧型基球，再将环氧型基球与有机胺进行反应，得到胺基型载体；

（2）胺基型载体的预处理；

将步骤（1）所制得的胺基型载体用磷酸缓冲溶液进行处理，处理后，用戊二醛溶液进行活化；

（3）单宁酶酶液的固定化；

将游离型的单宁酶酶液加入至磷酸缓冲溶液中溶解，再将步骤（2）中活化过的胺基型载体加至溶有单宁酶酶液的磷酸盐缓冲液中，活化后的胺基型载体占溶解后的单宁酶酶液重量的0.05~0.5倍，在20-30℃下振荡15-40h后过滤，用磷酸缓冲溶液进行冲洗，得到固定化的单宁酶；

步骤（1）中，所述的环氧型基球是苯乙烯系大孔吸附树脂、丙烯酸系大孔吸附树脂环氧型基球中的一种或两种组合；

所述的环氧型基球环氧值在300~500umol/g，所述的环氧型基球孔径为50-100nm。

2.如权利要求1所述的固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述的游离型单宁酶酶液为黑曲霉或米曲霉来源的单宁酶酶液。

3.如权利要求1所述的固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，步骤（3）所得到的固定化单宁酶的酶活力为50~250u/g。

4.如权利要求1所述的固定化单宁酶，其特征在于，固定化单宁酶在催化单宁酸制备没食子酸方面的应用。

5.如权利要求4所述的固定化单宁酶，其特征在于，固定化单宁酶在催化单宁酸制备没食子酸方面的应用，具体步骤如下：

（1）将固定化单宁酶装至层析柱中，制得酶床层；

（2）配置浓度为1~20%（w/V）的单宁酸溶液作为底物，让单宁酸溶液匀速流过步骤（1）制备的酶床层中，流速为0.1~2BV/h（BV为酶床层体积倍数），柱内温度控制在20-60℃，酶床层连续流过2~50BV的单宁酸溶液后，用去离子水0.2~10BV冲洗酶床层；冲洗后的酶床层继续用于下一批次使用；

（3）将步骤（2）中从酶床层流出的料液，去结晶精制得没食子酸。

6.如权利要求5所述的利用固定化单宁酶催化单宁酸制备没食子酸的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的将固定化单宁酶装至层析柱中，其中层析柱中酶床层的径高比为1/(1~20)。