[发明专利]一种诱导多花梾木愈伤组织形成的方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养，尤其涉及一种诱导多花梾木愈伤组织形成的方法。

背景技术

多花梾木，山茱萸科，梾木属，又称大花四照花，原产于北美洲东部，多花梾木四季景色各有不同，春天花瓣状苞片盛开，夏秋有色彩绚烂的叶片，花后有桔红色的浆果，是高档的景观植物和油料植物，市场前景广阔，我国尚处于引种阶段。多花梾木一般采用种子播种、扦插方法繁殖。本专利对多花梾木进行组培繁殖，通过对多花梾木器官组织进行培养，促进愈伤组织的形成，从而培育出更多的多花梾木的苗木，这是多花梾木组织培养的重要途径。

多花梾木是新引进品种，所以国内对多花梾木的组织培养相关方面的研究很少，但是有少数学者对于梾木属的其他植物进行过一些组织培养的研究，但是繁殖系数比较低。

发明内容

发明目的：针对现有技术中的问题，本发明提供一种诱导多花梾木愈伤组织形成的方法，以茎为外植体，在短时间内诱导获得大量的愈伤组织。

技术方案：本发明所述的诱导多花梾木愈伤组织形成的方法，包括：以多花梾木的茎为外植体，消毒后接种于培养基上进行光照培养；其中所述培养基的配方为：基础培养基+6-BA 1-2mg/L+NAA 0.1-0.3mg/L+蔗糖30-40g/L+琼脂6-9g/L。

所述外植体的制备方法为：采集多花梾木当年生枝条嫩茎，剪切成长1-3cm 的茎段。

所述消毒的方法包括：将外植体洗净后，先用70-75％酒精处理30-50s，无菌水清洗后再用0.1-0.2％升汞进行消毒处理，处理时间为3-6min，最后用无菌水冲洗干净，去除残余水分。

酒精处理的时间优选为30s，升汞的处理时间优选为5min。

培养基的配方优选为：基础培养基+6-BA 1.5-2mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L+蔗糖 30-40g/L+琼脂6-9g/L。

进一步优选的，培养基的配方为：基础培养基+6-BA 2mg/L和NAA 0.2mg/L +蔗糖35g/L+琼脂7g/L。

所述的基础培养基为WPM。

所述光照培养的温度为23-27℃，光照时间为16-17h/d，光照度为 2000-2200lx。

有益效果：本发明探索出积极而有效的多花梾木茎组织培养新方法，对培养基、培养条件、消毒方法进行了优化，可在短时间内诱导获得大量的愈伤组织。

附图说明

图1为实施例1正在清洗的多花梾木茎外植体；

图2为实施例1准备灭菌的部分培养基；

图3为实施例1正接种到培养基上的茎外植体；

图4为实施例1放在培养室内培养的接种苗；

图5为实施例1污染的接种苗；

图6为实施例1已形成大量愈伤组织的接种苗。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1

1、采集和清洗外植体

采集多花梾木当年生枝条嫩茎，剪切成长约1-3cm的茎段，放入白瓷缸中用加了少量洗衣粉的水淘洗2min，将泡沫淘洗干净后于自来水下冲洗2h。将去掉了表面灰尘和泥土的外植体放在超净工作台上消毒处理。

2、进行消毒处理

先用75％酒精处理30-50s，然后用无菌水清洗一次，再用0.1％升汞进行消毒处理，处理时间为3-6min，再用无菌水冲洗3次以上，残留的水分用无菌纸吸取。

3、进行接种工作

将消毒完毕的茎置于无菌纸上，用镊子接种于培养基上，培养基分别选用 WPM、MS、1/2MS、B5、N6，选用不同的6-BA和NAA的浓度：6-BA浓度分别为0、0.5、1、2mg/L，NAA的浓度分别是0、0.02、0.2、2mg/L，研究不同激素不同浓度下对外植体产生愈伤组织的影响。每一处理接种30瓶，重复3次，每试管瓶放置1个外植体。

4、控制培养条件

所有的培养基均添加蔗糖35g/L，琼脂7g/L，调节pH值为5.8左右，在121℃高压下灭菌25min。将接种后的外植体置于培养室内，光照16h/d，光照度约为 2000lx，温度控制在(25±2)℃。

5、结果与分析

5.1得出多花梾木茎最合适的消毒时间

表1不同消毒方式的影响