[发明专利]特发性膜性肾病相关的PLA2R重组蛋白及其应用

说明书

本发明公开一种PLA2R重组蛋白PLA2R‑T，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，该重组蛋白能够被患者血液中PLA2R抗体灵敏、特异地识别，且能够在体外大量表达，可达300mg/L，且能够与膜性肾病患者血液中的抗PLA2R抗体特异性地结合，并具有极高的亲和力，最低检测浓度能够达到0.39ng/ml。

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，尤其涉及一种PLA2R重组蛋白及其应用。

背景技术

膜性肾病是导致慢性肾病的主要原因之一，是临床上以无症状蛋白尿或肾病综合征为主要表现，病理上以肾小球基底膜上皮下弥漫的免疫复合物沉积伴基底膜弥漫增厚为特点的一组疾病。很多膜性肾病患者早期几乎没有症状，极易被漏诊、误诊。而中晚期患者，极易引发肾病综合征，临床表现为大量蛋白尿、低蛋白血症、高度浮肿、高脂血症等症状，使患者承受极大痛苦。流行病学调查显示约40％～60％的患者在5～15年内进展至终末期肾病，甚至尿毒症，5年死亡率约为5％～10％，属于难治性疾病。

膜性肾病分为特发性膜性肾病和继发性膜性肾病，其中前者占膜性肾病患者的80％。目前，临床区分这两种类型主要通过肾脏组织活检，即肾脏穿刺法，该方法对病人来说是个痛苦、有风险、经济负担重的过程，极易导致诸多并发症，并且适用人群因其方法学的特殊性受限。2009年国际上首次报道特发性膜性肾病的实质是磷脂酶A2受体(PLA2R)与自身抗体反应的结果。PLA2R由肾小球足细胞表达，主要分为两型，目前已经确认M型PLA2R是自身抗体的主要靶抗原，研究发现约75％的特发性膜性肾病患者可以在血清学检测中检出PLA2R抗体。临床研究表明用免疫荧光方法检测PLA2R抗体诊断特发性膜性肾病的灵敏度为52％，特异度为100％。表明PLA2R抗体是一个适合作为特发性膜性肾病筛查的生物标志物。

PLA2R抗体的免疫学诊断试剂均需要以PLA2R作为抗原来进行检测，因此PLA2R重组蛋白的天然构象和产量对于诊断试剂的灵敏度，特异度和规模化生产十分重要。PLA2R是一个膜蛋白，由Ricin B-type lectin结构域、Fibronectin type-II结构域、8个序列相似度非常高的C-type lectin结构域、跨膜结构域和胞内结构域组成，成熟蛋白全长1463个氨基酸，分子量约160kDa。PLA2R全长蛋白由于含有跨膜的疏水结构，重组表达时容易形成包涵体，产量非常低；人PLA2R蛋白在肾小球足细胞上表达时，仅有胞外区处于血液环境中，因此特发性膜性肾病患者的自身抗体都是针对PLA2R的胞外区结构，而PLA2R的胞外区域由1378个氨基酸组成，分子量较大(约150kDa)，在重组表达时产量也较低。因此无论是表达PLA2R的全长蛋白还是胞外区都难以获得大量蛋白，无法满足诊断试剂规模化生产的需要。

众所周知，蛋白质功能与各种蛋白质特定的空间构象密切相关，蛋白质的空间构象是其功能活性的基础，构象发生变化，其功能活性也可能随之改变。如何缩短蛋白长度，提高重组蛋白产量，又不影响PLA2R重组蛋白与患者自身抗体反应的灵敏度和特异性，是在研发重组蛋白中需要面临的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种PLA2R重组蛋白，该重组蛋白能够被患者血液中PLA2R抗体灵敏、特异地识别，且能够在体外大量表达，本发明的另一目的是提供该重组蛋白在制备PLA2R抗体含量检测试剂盒中的应用。

为实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：

本发明具体提供了一种PLA2R重组蛋白PLA2R-T，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供了一种编码所述PLA2R重组蛋白PLA2R-T的基因。

根据氨基酸序列密码子编码的偏好性，本发明还提供了一种具体的编码所述PLA2R重组蛋白PLA2R-T的基因，其序列如SEQ ID No.1所示。