[发明专利]一组用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合及试剂盒

说明书

本发明公开了用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合及试剂盒。所述引物对组合分别为SEQ ID NO:1‑2，SEQ ID NO:3‑4和SEQ ID NO:5‑6。其中SEQ ID NO:1‑2对应CD157基因；SEQ ID NO:3‑4对应IL‑1b基因；SEQ ID NO:5‑6对应MS4A6A基因。利用本发明的引物进行RT‑PCR扩展，然后将相关的基因表达水平代入建立的公式中，能将活动性结核病人与非结核性肺炎病人区分，使得结核诊断更加准确、快速。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一组用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合及试剂盒。

背景技术

结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染性疾病，结核分枝杆菌不仅可引起肺结核(85％)，而且可引起肺外多种器官的结核病。尽管目前已有有效的抗结核药物，但结核病仍然是当前感染性疾病的头号杀手，全球每年约200万人死于结核病；全球约三分之一的人口感染结核分枝杆菌，在这些被称为结核菌潜伏感染(LTBI)的人群中，有约10％最终将进展为活动性结核病。

由于目前缺乏有效的结核病疫苗，结核病的预防控制主要依赖于早期发现、治疗、隔离活动性结核病人。然而，现今诊断活动性结核病的检测技术存在严重不足，不能满足临床和结核病预防控制的要求。结核病诊断的金标准为痰结核分枝杆菌微生物检查(痰图片或痰培养)，该检测技术虽然特异性高，但存在敏感性低(不足40％)，耗时长(结核菌培养耗时1-2个月)，实验室生物安全要求高的缺点。换而言之，目前60％-70％痰菌阴性的结核病人临床上的诊断需要其他的检测和数据支持。事实上，临床上该类型的结核病人的诊断大多数是临床诊断，即依靠临床表现、影像学或抗结核治疗效果进行诊断。这种诊断方法最大的缺点是不能将结核病与其结核菌引起的他肺部疾病区分。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一组用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合及试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供一种CD157、IL-1b和MS4A6A组合作为区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的分子标志物的用途。

本发明还提供一组用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合分别为SEQ ID NO:1-2，SEQ ID NO:3-4和SEQ ID NO:5-6；其中SEQ ID NO:1-2对应CD157基因；SEQ ID NO:3-4对应IL-1b基因；SEQ ID NO:5-6对应MS4A6A基因。

本发明还提供一种用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的试剂盒，其特征在于，含有权利要求2所述的引物对组合。

所述引物对组合及所述试剂盒用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的用途。

所述引物对组合及所述试剂盒用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的方法，其特征在于，

分别采用SEQ ID NO:1-2，SEQ ID NO:3-4或和SEQ ID NO:5-6作为引物，对待测病人PBMC的DNA进行RT-PCR反应；

计算每个基因的相对表达量：根据实时定量PCR的结果，分别检测出3个基因的荧光定量CT值，通过R语言算法包Glmnet，建立机器学习模型套索/弹性网模型LASSO，然后得到蛋白组合换算的结果，用R表示；

结果判断：当R>0.5时，则判断为活动性结核；反之，则为非结核性肺炎病人。

进一步，所述RT-PCR反应的反应体系为：

进一步，所述RT-PCR反应的反应程序为，95℃30秒；95℃5秒，60℃30秒，40个循环。