[发明专利]以人ADH2*2基因143位点AA型为模板的阳性参考品

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种以人ADH2*2基因143位点AA型为模板的阳性参考品，该阳性参考品用于验证ADH2*2基因型检测试剂盒在应用于样本检测时样本是否为阳性的辅助判断。

背景技术

质控品是指用于体外诊断的质量控制物质，其具有已知浓度含量的目标检测物，为使人们确信某一产品或服务质量能满足规定的质量要求所必须的产品。质控品的使用目的是为了验证整个PCR反应过程具有准确性、有效性和特异性，并监控检测系统的状态。仪器在正式投入使用后，应定期对其校准，避免由于仪器原因导致的实验偏差。再次，在收到每批新试剂后，应首先对其进行预实验，确证新试剂质量后，再用于对临床标本的检测。

但是据申请人了解，目前在检测人ADH2*2基因143位点AA型质量控制方面没有阳性参考品。

发明内容

本发明旨在提供一种以人ADH2*2基因143位点AA型为模板的阳性参考品，用于验证被检样本中是否含有人ADH2*2基因143位点AA型这一检测结果是否准确，解决了人ADH2*2基因的质量检测问题。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种以人ADH2*2基因143位点AA型为模板的阳性参考品，该阳性参考品是一种以碱基序列为主要成分的试剂，该碱基序列包含人ADH2*2基因片段，所述人ADH2*2基因片段为5’-TCTTTTCTGAATCTGAACAGCTTCTCTTTATTCTGTAGATGGTGGCTGTAGGAATCTGTCACACAGATGACCACGTGGTTAGTGGCAACCTGGTGACCCCCCTTCCTGTGATTTTAGGCCATGAGGCAGCCGGCATCGTGGAGAGTGTTGGAGAAGGGGT-3’，其中，带有下划线的碱基位点是人ADH2*2基因的143位点，所述143位点用于表征人ADH2*2基因的AA型可突变为人ADH2*2基因的GG型的位置。

上述技术方案中的有关内容解释如下：

1、上述方案中，所述阳性参考品中还含有缓冲试剂，该缓冲试剂选自pH7.6的Tris-HCl缓冲液或pH7.6的TE缓冲液。

2、上述方案中，所述阳性参考品中含有的人ADH2*2基因143位点AA型的基因序列是构建到质粒载体上保存，根据现有技术即可得到，质粒构建过程如下：

引物设计——PCR扩增——割胶回收DNA片段——构建载体——转化培养——阳性克隆鉴定——37℃摇床培养——质粒抽提——测序确认碱基序列。

抽提后的质粒再配制成所述阳性参考品，配制方法如下：

（1）配制稀释液：加入50%配方量的纯化水→加入Tris-HCl缓冲液（pH7.6）→加入剩余的纯化水（涡旋震荡3次，每次5秒）→得0.002mol/L的Tris-HCl（pH 7.6）稀释液；

（2）人ADH2*2基因143位点AA纯合载体质粒预稀释：加入50%配方量的所述稀释液→加入人ADH2*2基因143位点AA纯合载体质粒溶液→加入剩余的所述稀释液（涡旋震荡3次，每次5秒）→得到X拷贝/微升人ADH2*2基因143位点AA纯合质粒溶液（X代表质粒浓度的具体数值）；

（3）得到AA型阳性参考品：加入50%配方量的稀释液→加入X拷贝/微升人ADH2*2基因143位点AA纯合质粒溶液→加入剩余的稀释液（涡旋震荡3次，每次5秒）→得到AA型阳性参考品。

本发明的特点以及有益效果是：所述阳性质控品实质是事先设计好的、当做已知浓度及碱基序列的样本，和其他被检样本（即人全血）一起利用相关的ADH2*2基因型检测试剂盒进行检测，从而验证被检样本检测结果的准确性。也就是说，在利用ADH2*2基因型检测试剂盒检测被检样本时，本发明的阳性参考品相当于是一种已知浓度的阳性样本，用于验证ADH2*2基因型检测试剂盒的检测结果是否真实、有效，解决了人ADH2*2基因的质量检测问题。

附图说明

附图1为人ADH2*2基因的143位点为GG型时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图，横坐标是温度，纵坐标是荧光微分值；

附图2为人ADH2*2基因的143位点为AA型时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图，横坐标是温度，纵坐标是荧光微分值；

附图3为人ADH2*2基因的143位点为AG型时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图，横坐标是温度，纵坐标是荧光微分值；

附图4为空白对照时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图，横坐标是温度，纵坐标是荧光微分值。