[发明专利]一种铁皮石斛外植体的培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物外植体培养领域，特别涉及一种铁皮石斛外植体的培养方法。

背景技术

铁皮石斛为兰科石斛，属多年生附生草本植物，又名黑节草，是一种珍贵的药用植物，因其表皮呈铁绿色而得名，自古以来铁皮石斛就被认为是滋阴补益的珍品。

铁皮石斛在《神农本草经》中列为上品，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效，用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热等多种病症。铁皮石斛富含多糖等有效成分，对咽喉疾病、肠胃疾病、白内障、糖尿病具有显著疗效，还具有抗肿瘤，抗衰老，增强人体免疫力及扩张血管等作用。除药用价值外，国内还用来生产保健品，沿海发达地区现在还流行用铁皮石斛制成高档茶、饮料等；以铁皮石斛加工而成的“西枫斗”，国际市场价格为每公斤1300美元，“龙头凤尾型铁皮枫斗”国际市场价格为每公斤3000美元，铁皮石斛用途广，需量大，价格高，据有关部门调查算测，铁皮石斛全国年需求量达30000吨以上。

今十几年来，随着研究的深入发现它含有石斛多糖、石斛碱、石斛苷、石斛胺和石斛次碱等，以及18种氨基酸和多种微量元素等物质，具有显著提高免疫力功能，抑制肿瘤生长和扩张肠系膜动脉血管等作用，颇具市场开发价值。

铁皮枫斗是将铁皮石斛的茎利用一定的加工工艺精制而成，主要讲茎间比较矮小、茎肉质粗壮、质地柔软富含膏滋黏液的植株，经过烘干后，用手工双向扭曲而成。到2006年底，全国有铁皮石斛为原料的药品2个，保健食品79个；剂型有颗粒剂、胶囊剂、软胶囊、口服液、丸剂、茶、饮料、口含片等。

中国野生药用植物据统计在5000种以上，其中较常用的有500多种，依靠人工栽培的有250多种。传统的获取中草药的方法是依靠大量的采摘野生植物资源为来源，而野生药用植物资源有限，当采摘量超过其自然繁殖的再生能力时，必然导致该物种遭受破坏甚至会面临濒危。同时，随着生态环境的日益恶化，也必将进一步导致部分药用植物资源的匮乏。

铁皮石斛野生于我国秦岭和长江流域以南，海拔500～1000m的岩溶峰谷，气候高温、高湿地区。在国内主要分布于云南、安徽、贵州、浙江、江西、广西、广东等省区。以云南、广西的“喀斯特”地貌区为主产区。其自然生长于高山峻岭的悬崖壁和岩石缝之间，对生长条件要求十分苛刻。再说，铁皮石斛种子极小，无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，自然繁殖率极低，加上人为过渡采集和自然环境破坏，目前我国野生铁皮石斛资源濒临灭绝，已被列为国家二级保护植物。

通过组织培养可以解决野生资源濒危的难题。组织培养是实现快速繁殖、人工栽培的最佳技术手段，一般采用野生铁皮石斛植株，选择合适的外植体接种到培养基上进行细胞培养，以达到无激素、无污染，克服地域、气候等条件的制约，在保证药效的前提下增加市场供应量，满足人们的健康需求。

其中在铁皮石斛外植体的丛生芽诱导培植过程中，其培养基的设置和培养条件尤为重要，如何使得铁皮石斛外植体的培养更高效，丛生芽生长情况更好，成为一个急切解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种铁皮石斛外植体的培养方法。

本发明所采取的技术方案是：一种铁皮石斛外植体的培养方法，其包括如下步骤：

1)以1/2MS培养基作为基本培养基，添加植物激素复配物，得诱导培养基，灭菌处理，待用；

2)取铁皮石斛外植体置于步骤1)的诱导培养基中，在温度为23～27℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为12h/d，相对湿度为55～65％的培养条件下进行铁皮石斛丛生芽诱导培养；

其中所述植物激素复配物由2mg/L的6-BA和0.5mg/L的NAA混合复配而成。

作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述1/2MS培养基中的琼脂含量为0.9％，蔗糖浓度为3％，pH值为5.8～5.9。

作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述灭菌处理为在121℃、105Pa的条件下灭菌20min。

作为上述方案的进一步改进，步骤2)所述的铁皮石斛丛生芽诱导培养的培养周期为2个月。

本发明的有益效果是：本发明在基本培养基中添加了特定的植物激素复配物，使其对铁皮石斛外植体具有优异的丛生芽增殖作用，并通过限定培养条件，使得培养出的铁皮石斛丛生芽表现出健壮、饱满的良好生长状况。

具体实施方式