[发明专利]稳定的肌酐检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化检测领域，特别是涉及一种借助于测定材料的化学物理性质来测定材料的试剂盒。

背景技术

肌酐(creatinine，Cr)是肌肉在人体内代谢的产物，每20g肌肉代谢可产生1mg肌酐。血中肌酐来自外源性和内源性两种，外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物；内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。在肉类食物摄入量稳定时，身体的肌肉代谢又没有大的变化，肌酐的生成就会比较恒定。

在肌肉中，肌酸主要通过不可逆的非酶脱水反应缓缓地形成肌酐，再释放到血液中，随尿排泄。因此血肌酐与体内肌肉总量关系密切，不易受饮食影响。肌酐是小分子物质，通过肾小球滤过排出体外。在肾小管内很少吸收，每日体内产生的肌酐，几乎全部随尿排出，一般不受尿量影响。肾功能不全时，肾小球过滤降低，造成血清肌酐水平增加在体内蓄积成为对人体有害的毒素。血浆肌酐的正常上限值为100μmol/L左右。

肾单位时间内，把若干毫升血浆中的内生肌酐全部清除出去，称为内生肌酐清除率(Ccr)。临床上检测血肌酐，计算内生肌酐清除率，可反映肾小球滤过功能和粗略估计有效肾单位的数量，因其操作方法简便，干扰因素较少，敏感性较高，为目前临床常用的较好的肾功能试验之一。

血清肌酐含量的测定方法有很多，现有技术中主要有酶比色法和Jaffe氏苦味酸测定法。酶比色法的反应原理是以肌酐作为底物，经肌酐脱氨酶催化脱氨生成甲基乙内酰脲，氨与α-酮戊二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶的作用生成谷氨酸，NAD和水，在340nm波长下测定NADH的吸光度变化率，计算其含量。虽然酶比色法广泛应用于肌酐测定，但是酶比色法试剂稳定性不好，检测结果重复性差，且价格昂贵。

Jaffe氏苦味酸法的反应原理是样品中的肌酐在碱性环境与苦味酸(2,4,6-三硝基苯酚)反应生成橙红色的复合物，将反应液置于紫外/可见光分析仪下或半、全自动生化分析仪下，检测在主波长510nm处吸光度上升的速度，通过吸光度变化值，测算样品中肌酐的活性。然而现有的Jaffe氏苦味酸法试剂稳定性不好，2,4,6-三硝基苯酚与碱性缓冲溶液混合后24h内就明显变红，致使检测结果偏高，检测准确性降低。

发明内容

本发明是为了解决以上技术问题，而提供了一种毒性低、稳定性高、检测灵敏准确的肌酐检测试剂盒及其使用方法。

本发明涉及一种稳定的肌酐检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂1；所述试剂1包括肌酸酶、肌氨酸氧化酶和防腐剂；

所述防腐剂包括：红霉素和proclin系列防腐剂(西宝生物科技(上海)股份有限公司产品)。

优选地，所述试剂1中肌酸酶＞50U/mL；肌氨酸氧化酶＞10U/mL。

优选地，所述试剂盒还包括试剂2；

所述试剂1包括：

所述试剂2包括：

其中HEPES缓冲液pH值为7.5。

优选地，所述复合稳定剂包括吐温80 10～13g/L，谷氨酸20～30g/L，谷胱甘肽1～3g/L，海藻糖50～60g/L，十二烷基二甲基甜菜碱2～6g/L，卵磷脂3～6g/L，缓冲液100～120mmol/L；其为申请号为201610166107.2的多种抗体的复合稳定剂及其使用方法中的复合稳定剂。

本试剂盒采用氧化酶二步酶法测定血清中肌酐含量。反应第一步，利用过氧化氢酶分解样本中的内源性肌酸，以H₂O和O₂的形式被清除；反应第二步，样本中的肌酐在酶的作用下生成H₂O₂，过氧化氢酶在过氧化氢酶抑制剂作用下失活，生成的H₂O₂参与Trinder反应并显色。具体如下：

1、第1反应：

H₂O₂被过氧化氢酶消除。

2、第2反应：

优选地，所述试剂1包括：

所述试剂2包括：

其中HEPES缓冲液pH值为7.5。

本发明还涉及一种稳定的肌酐检测试剂盒的使用方法，所述方法包括以下步骤：

该检测试剂盒的测定方法为两点终点法；