[发明专利]同型半胱氨酸检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化检测领域，特别是涉及一种借助于测定材料的化学物理性质来测定材料的试剂盒。

背景技术

同型半胱氨酸(又称高半胱氨酸，homocysteine,Hcy)是蛋氨酸代谢过程中的中间产物。同型半胱氨酸在体内的分解代谢，受两方面因素影响最大。一是与先天遗传有关的某些生物酶的缺乏，另一个就是体内叶酸、维生素B6、维生素B12等营养元素的缺乏。这两种缺乏都会影响同型半胱氨酸转化为其他物质，导致高同型半胱氨酸血症。Hcy的测定，对心血管疾病、尿毒症、动脉粥样硬化、糖尿病、老年痴呆症等疾病的判定中，有重要的临床意义。

血浆中的同型半胱氨酸约70％与白蛋白结合，为结合型。其余的游离型则主要以二硫同型半胱氨酸和以二硫键结合的同型半胱氨酸-半胱氨酸化合物形式存在，只有少量以还原型同型半胱氨酸存在于血浆中。我们通常所指的是总的同型半胱氨酸浓度。

影响同型半胱氨酸水平最主要的因素莫过于遗传于食物营养缺乏。遗传因素主要包括N5甲基四氢叶酸转甲基酶及胱硫醚-β-合成酶的基因发生突变，引起酶的活性降低，从而导致高同型半胱氨酸血症。现在已经证明N5甲基四氢叶酸转甲基酶的缺陷，在体内叶酸缺乏的情况下，可以引起同型半胱氨酸浓度的明显升高。而根据Mudd等的研究，由遗传缺陷引起的胱硫醚-β-合成酶的活性降低，可导致血浆中同型半胱氨酸的浓度超过正常值的十倍左右。

对近1200名老人的研究表明，体内同型半胱氨酸的水平与饮食有着密切的关系，血浆中维生素B6、B12和叶酸的浓度越低，其同型半胱氨酸的浓度越高。由于动物蛋白中蛋氨酸的含量比植物蛋白约高三倍左右，可以产生较多的同型半胱氨酸，因此可对人体的动脉组织造成损伤。

其它因素包括性别、年龄、肾功能的损害、以及服用影响叶酸和B族维生素的药物，都可影响同型半胱氨酸的水平。尤其是肾功的损害，会严重影响那些含硫氨基酸的排出，因为肾小管内皮细胞的胱硫醚-β-合成酶对同型半胱氨酸的转化作用，被认为血液中的非蛋白结合型同型半胱氨酸很重要的代谢途径。

通常认为成人空腹血浆总Hcy水平正常值为4～12μmol/L，理想值为<10μmol/L，高于15μmol/L则被认为是高同型半胱氨酸败血症；老年人(≥60岁)空腹血浆总Hcy水平正常值为15～20μmol/L，高于20μmol/L被认为是高同型半胱氨酸败血症。

目前，实验室常用的Hcy测定方法有色谱法、酶联免疫法及荧光偏振免疫法。色谱法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点，现在公认其为测定血浆Hcy浓度的首选方法，但因色谱法(HPLC及GC-MS)需要的设备复杂且昂贵，难以适应常规临床化学实验室应用，而酶联免疫测定法可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛欢迎。

酶联免疫法检测同型半胱氨酸的原理是基于小分子捕获技术(SMT)的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶。Hcy被转化为游离型后，通过与共价底物反应，循环放大，同时产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD，样本中的Hcy浓度与NADH转化速率成正比。

酶免疫检测法是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分析方法，由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的同型半胱氨酸检测试剂中由于存在多种酶，会使该试剂的稳定性受到影响，不利于试剂的长期保存，从而造成浪费的不良后果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种稳定性高、准确度和精密度高的同型半胱氨酸检测试剂盒及其使用方法。

本发明涉及一种同型半胱氨酸检测试剂盒及其使用方法，所述同型半胱氨酸检测试剂盒包括试剂1和试剂2；

所述试剂1包括：

所述试剂2包括：

所述胱硫醚-β-合成酶和蛋氨酸合成酶的酶的比活力相同，胱硫醚-β-裂解酶和蛋氨酸-γ裂解酶的酶的比活力相同。

优选地，所述复合稳定剂包括吐温80 10～13g/L，谷氨酸20～30g/L，谷胱甘肽1～3g/L，海藻糖50～60g/L，十二烷基二甲基甜菜碱2～6g/L，卵磷脂3～6g/L，缓冲液100～120mmol/L；其为申请号为201610166107.2的多种抗体的复合稳定剂及其使用方法中的复合稳定剂。

优选地，所述试剂1包括：

所述试剂2包括：