[发明专利]转基因大豆W82-HAL1-8062转化事件外源插入载体旁侧序列及其应用

说明书

本发明公开了转基因大豆W82‑HAL1‑8062转化事件外源插入载体左侧翼序列和右侧翼序列，其序列如SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：8所示。本发明的转基因大豆W82‑HAL1‑8062转化事件外源插入载体侧翼序列可以用于特异性定性检测大豆及相关产品是否含有W82‑HAL1‑8062转化事件。本发明首次测序公布了转基因大豆W82‑HAL1‑8062转化事件外源插入侧翼序列，建立了转基因大豆W82‑HAL1‑8062转化体特异性定性PCR检测方法，该方法灵敏，准确，简单，可靠，具有广阔的市场前景。

技术领域

本发明涉及转基因大豆领域，具体而言，涉及转基因大豆W82-HAL1-8062转化事件外源插入载体旁侧序列及其应用。

背景技术

大豆是世界上主要的油料作物。2015年全球转基因作物的种植面积高达1.797亿公顷，其中大豆种植面积为0.916亿公顷，占总面积的51％^[1]。中国不仅是农业生产大国，更是农业消费大国。自1996年以来，中国已成为大豆净进口国。随着国内需求不断地增加，转基因大豆进口量也在逐年增大。仅在2015年，中国转基因大豆进口量高达8169万吨，同比增长14.4％^[2]。

对转基因大豆生物安全问题进行科学研究和评价是对转基因大豆进行监督管理，保障其健康发展的重要技术基础，而转基因检测技术是生物安全评价的关键技术之一^[3]，对于转基因植株的身份验证具有重大意义，并有助于对外源基因的表达机制和外源基因在受体基因组中产生的影响进行研究，从而有助对于转基因植株的生物安全性做出评估^[4]。

HAL1基因是酿酒酵母中与耐盐相关的基因，该基因的过量表达可以提高酵母对NaCl的胁迫，而敲除调该基因，则大大降低酵母的耐盐性。目前，已经有一些HAL1转基因植物，但尚未研究获得HAL1转基因大豆，更缺少能够有效对HAL1转基因大豆进行检测的方法。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供转基因大豆W82-HAL1-8062转化事件外源插入载体左侧翼序列，所述序列包括pCHAL1载体上的T-DNA以及该T-DNA插入位点左侧的大豆基因组序列，所述序列是第1号染色体上第49468395位核苷酸处插入pCHAL1的T-DNA的转基因大豆的特异性片段，能够特异性地指示上述转基因大豆。

本发明的第二目的在于提供转基因大豆W82-HAL1-8062转化事件外源插入载体右侧翼序列，该序列包括pCHAL1载体上的T-DNA右侧翼序列以及该T-DNA插入位点右侧的大豆基因组序列，该DNA片段是第1号染色体上第49468395位核苷酸处插入pCHAL1的T-DNA的转基因大豆的特异性片段，能够特异性地指示上述转基因大豆。

本发明的第三目的在于提供上述左侧翼序列或右侧翼序列在检测转基因大豆中的应用，可以快速、准确地检测样品是否来自于第1号染色体上第49468395位核苷酸处插入pCHAL1的T-DNA片段的转基因大豆，尤其是W82-HAL1-8062或由W82-HAL1-8062育种而成的转基因大豆。

本发明的第四目的在于提供根据上述左侧翼序列设计的PCR引物对，通过上述PCR引物对能够快速、准确地检测待测样品的1号染色体上第49468395位核苷酸处是否插入的pCHAL1的T-DNA，具有检测方便、特异性好、扩增效率高、以及准确性好的优点。

本发明的第五目的在于提供根据上述右侧翼序列设计的PCR引物对，通过上述PCR引物对能够快速、准确地检测待测样品是否插入了pCHAL1的T-DNA，具有检测方便、特异性好、扩增效率高、以及准确性好的优点。

本发明的第六目的在于提供一种用于PCR的试剂盒，所述试剂盒将上述引物对与PCR用到的其他辅助试剂集成在一起，具有使用方便的优点。