[发明专利]一种细胞活性因子凝胶的制备方法及在美容抗衰中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种可用于美容、护肤的干细胞活性因子的制备方法，该方法制备的活性凝胶可用于美容抗衰行业。

背景技术

随着国家不断发展，社会不断进步，人们对自身美的追求，尤其是女性对于日常生活护肤美容愈加重视，化妆品的使用越来越频繁。

现有市场出售的化妆品，大多是通过植物成分提取或精细化工制作工艺加工而成，其产品中的大分子物质不易被皮肤吸收，造成皮肤的额外负担。而且很多护肤品中含有铅汞、乙醇、着色剂及矿物油等对人体肌肤有害的物质，消费者每天在使用这些护肤品的同时，不知不觉对自身皮肤造成了一定的损害，严重的还会造成皮炎及感染问题。目前阶段的化妆品产品基本都不具有生物活性，不能从根本上改善表皮细胞的生存环境和新陈代谢，对于外界因素造成的皮肤损害没有修复作用。

大量的研究显示间充质干细胞依靠其强大的分泌能力实现皮肤再生修复的，如表皮细胞生长因子的释放。因此，如何从干细胞的培养基中分离浓缩干细胞分泌的活性细胞因子成为干细胞在美容抗衰领域应用的关键。

发明内容

本发明的目的是提供一种干细胞活性因子凝胶的简单制备方法，解决了现有技术中使用活性干细胞引发的各种弊端或干细胞活性因子凝胶制备复杂等存在的问题，从干细胞培养基中分离浓缩活性因子，且不需要进一步分离，可直接制备成凝胶用于抗衰美容，非常具有应用前景，为抗衰美容提供了有效的活性原料。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是，一种细胞活性因子凝胶的制备方法：包括以下步骤：(1)活性因子悬液的制备：从脐带、脂肪、胎盘分离、纯化所述间充质干细胞，使用含10％胎牛血清的DMEM或DF12培养基常规培养，待细胞融合度达80-90％时，用胰蛋白酶消化，使用上述完全培养基进行中止，离心收集细胞，再用无血清DMEM或DF12培养基悬浮细胞沉淀，调整细胞浓度传代培养，收集15代以内的培养上清，离心除掉不溶性杂质和变性蛋白，取上清液用于活性因子的分离纯化。

(2)活性因子分离纯化：将上清液与1～10g/L壳聚糖溶液10:1-20:1混合，调节pH值，然后置于摇床中振摇，离心，沉淀经弱碱性水溶液洗涤溶解。

(3)干细胞活性因子凝胶的配制：在上述活性因子浓缩液逐滴添加保湿剂，边添加，边进行混合，所述保湿剂剂与活性因子悬液的体积比为1∶2；混合均匀后，放到-20℃冰箱中冻存待用。

本发明步骤3中的保湿剂为透明质酸钠或γ-聚谷氨酸。

本发步骤3所述保湿剂与活性因子悬液的体积比为1∶2。

本发明所述的干细胞活性因子凝胶的制备方法制得的干细胞活性因子凝胶在美容抗衰中的应用。

使用时，将装有上述干细胞活性因子凝胶取出，解冻，将干细胞活性因子凝胶和化妆品混合或直接使用。

本发明将高分子材料凝胶添加到活性因子悬液中，可以缓释因子活性，达到长时间促进表皮细胞生长，修复皮肤抗衰等作用。

本发明可通过调节处方和粘度，制成喷雾剂或擦剂，分装于不同形式的容器中。

本发明所述干细胞活性因子凝胶具有以下优势 ：

(1)采用能抑菌的高分子材料提取的干细胞分泌活性因子不需要进一步纯化可直接使用，方法简单实用，避免了间充质干细胞分泌因子提取的繁琐步骤；

(2)配方中不含动物源血清，防腐剂；凝胶制备后采用低温保存方式，可以有充足的时间进行放行检验，满足药典法微生物检测、支原体检测的时间要求，保证了制品质量；

(3)配方中含有天然保湿成份，能够促进活性因子的长期释放，利于皮肤修复。

(4)不含活性细胞，无需繁杂操作，可直接用于化妆品。

具体实施方式

为了使本领域相关技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。

实施例1本发明所述干细胞活性因子凝胶的的制备方法

活性因子悬液的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM或DF12培养基(完全培养基)对间充质干细胞常规培养，待细胞融合度达85％左右时，用胰蛋白酶消化，使用上述完全培养基进行中止，离心收集细胞，再用无血清DMEM或DF12培养基悬浮细胞沉淀，调整细胞浓度传代，收集培养上清，离心除掉不溶性杂质和变性蛋白，取上清液用于活性因子的分离纯化。