[发明专利]体外检测上皮肿瘤细胞培养物对治疗剂反应性的方法和试剂盒

权利要求书

1.用于体外检测人上皮肿瘤细胞培养物对治疗剂的反应性的方法，包括：

(a)将包含人上皮肿瘤细胞的人离体来源的癌组织起源球状体(CTOS)解离成基本上单细胞的悬浮液，

(b)在确定成分的细胞培养基中与饲养细胞共培养由步骤(a)解离的CTOS，所述确定成分的细胞培养基包含至少一种Rho相关的含盘绕圈的蛋白激酶(ROCK)抑制剂，并且不含或基本不含骨形态生成蛋白(BMP)抑制剂和Wnt/β-连环蛋白信号通路激动剂，

(c)将治疗剂施用到步骤(b)得到的培养物中，和

(d)测量上皮肿瘤细胞增殖和/或上皮肿瘤细胞凋亡，

其中上皮肿瘤细胞增殖的减少和/或上皮肿瘤细胞凋亡的诱导指示了培养物对治疗剂的反应性，其中缺乏上皮肿瘤细胞增殖的减少和/或上皮细胞凋亡的诱导指示了培养物对治疗剂的抗性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述BMP抑制剂是头蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述Wnt/β-连环蛋白信号通路激动剂是R-spondin-1。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法在步骤(a)和(b)之后约14天内在细胞培养基中提供至少约10％的肿瘤细胞增殖。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，包括在共培养解离的CTOS的同一天施用治疗剂。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，包括在共培养解离的CTOS后至少一天施用所述治疗剂。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，包括在共培养解离的CTOS后1、2、3、4、5、6或7天内施用所述治疗剂。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，包括在施用所述治疗剂的14天内测量上皮肿瘤细胞增殖和/或上皮肿瘤细胞凋亡。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，包括在施用所述治疗剂的14、13、12、11、10、9、8、7、6或5天内测量上皮肿瘤细胞增殖和/或上皮肿瘤细胞凋亡。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中测量上皮肿瘤细胞增殖的步骤包括测量细胞增殖标志物。

11.根据权利要求11所述的方法，其中所述细胞增殖标志物选自3H-胸苷、溴脱氧尿苷(BrdU)、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(Edu)、Ki-67和增殖细胞核抗原(PCNA)中的一种或多种。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中测量上皮肿瘤细胞凋亡的步骤包括测量细胞凋亡标记。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述细胞凋亡标志物选自荧光染料标记的半胱天冬酶抑制剂(FLICA)、半胱天冬酶激活、聚ADP核糖聚合酶(PARP)切割、DRAQ5、DRAQ7和末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)dUTP切口标记(TUNEL)测定。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述上皮肿瘤细胞增殖和/或上皮肿瘤细胞凋亡的测量通过高内涵筛选来完成。

15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是5-FU、奥沙利铂、伊立替康或其组合。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其用于抗肿瘤治疗剂的体外筛选。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述上皮肿瘤细胞选自人结肠癌细胞、人结直肠癌细胞、人肺癌细胞、人胃癌细胞和人乳腺癌细胞。