[发明专利]一种麦红吸浆虫不同发育期稳定表达的内参基因RPS18及其应用

说明书

本发明公开了一种麦红吸浆虫不同发育期稳定表达的内参基因RPS18及其应用。该内参基因RPS18的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明根据已测得的麦红吸浆虫转录组数据获得麦红吸浆虫相关基因序列，设计引物，PCR反应获得麦红吸浆虫6个基因核苷酸序列。本发明方法以不同发育条件下的麦红吸浆虫为实验材料进行Real time PCR检测，Ct数据利用geNorm内参基因稳定性分析软件进行分析，筛选出不同发育条件下麦红吸浆虫表达最稳定的内参基因RPS18，由此为后续不同发育期条件下麦红吸浆虫基因的定量提供了参考，对定量实验的结果准确性提供了保证。

一、技术领域：

本发明属于分子生物学中昆虫体内稳定表达的内参基因技术领域，具体涉及一种麦红吸浆虫不同发育期稳定表达的内参基因RPS18及其应用。

二、背景技术：

麦红吸浆虫(Sitodiplosismosellana(Gehin))是广泛分布于亚洲、北美和欧洲小麦产区的毁灭性的害虫。在我国元明清及民国均有为害小麦的记载。1950年代麦红吸浆虫主发区包括浙江、江西、江苏、安徽、河南、河北、山西、陕西等北纬32～36度之间，成为由西北到东南的一条带状，横亘在我国东部大平原的中部。自1950年代后期六六六大规模用于土壤处理，直到1983年六六六停止使用，这个时期麦红吸浆虫不再是小麦生产问题。1985年以后，麦红吸浆虫在我国冬小麦主产区黄淮海平原和西北地区再度发生，东部平原以河南、安徽、山东、河北、天津、北京最为严重，发生区向北推移至北纬40度。多年来的研究表明，麦红吸浆虫特有的越夏滞育、越夏至越冬滞育、二次滞育和延长多年滞育的滞育多态现象是引起其间歇性和局域性猖獗成灾的主要原因。麦红吸浆虫一般每年发生一代，以老熟幼虫(三龄虫)结圆茧(称为休眠体)在土中越冬。次春当小麦返青、起身时，幼虫即自茧内爬出并上升到表土层(有些幼虫有多年越冬现象)准备化蛹。至小麦孕穗时则开始结长茧化蛹。如湿度偏低，温度较高时，幼虫多不结茧而直接在土中化成裸蛹。蛹期一般有8～10天，至抽穗扬花时(全国由南(河南南阳)到北(天津、唐山)在4月中旬至5月上旬)即羽化为成虫，这一阶段吸浆虫的活动规律与小麦的物候期有紧密的对应关系。

实时PCR(real-time quantitative PCR)是一种在转录水平上对mRNA表达量进行定量的方法，具有快速、可重复性好和高灵敏度等优点。因此，在基因表达的定量研究中获得广泛应用。实时荧光定量PCR是一种强有力的检测基因表达谱的方法，可以分析基因在不同时期的表达差异以及经过不同处理的样本间基因的表达差异等等。在分析中选用一种合适的内参基因对目的基因的表达量进行校正可以提高该方法的灵敏度和重复性。由于目前许多目的基因的实时荧光定量研究是在多个不同的组织中进行比较的；因此，需要尽量一致的实验条件，但由于样品在RNA的产量、质量以及逆转录效率上可能存在的差别，因此实验中的表达差异比较大。为了降低实验中的差异，通常在研究中会选择看家基因作为内参基因对目的基因进行校正和标准化，以校正转录效率和cDNA用量，弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别，从而避免mRNA转录的高动态性、样品操作及下游处理步骤的多变性造成的误差。因此，选择合适的内参基因成为实验结果准确的关键。

三、发明内容：

本发明要解决的技术问题是：提供一种麦红吸浆虫不同发育期稳定表达的内参基因RPS18及其应用，为麦红吸浆虫不同发育期内参基因的选择提供依据，为麦红吸浆虫不同发育期基因表达水平的数据可靠性提供保障。

为了解决上述问题，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种麦红吸浆虫不同发育期稳定表达的内参基因RPS18，其核苷酸序列为：