[发明专利]用于鉴定桉树无性系的STR引物及其应用

权利要求书

1.用于鉴定桉树无性系的STR引物在鉴定桉树无性系中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

a. 提取待测桉树DNA；

b. 以步骤a提取的桉树DNA为模板，以用于鉴定桉树无性系的STR引物进行多重PCR扩增，得到PCR产物；

所述的用于鉴定桉树无性系的STR引物，包括以下8对引物：

EUCeSSR0475引物：其正向引物如SEQ ID NO.1所示，其反向引物如SEQ ID NO.2所示；

EUCeSSR0204引物：其正向引物如SEQ ID NO.3所示，其反向引物如SEQ ID NO.4所示；

EUCeSSR419引物：其正向引物如SEQ ID NO.5所示，其反向引物如SEQ ID NO.6所示；

EUCeSSR1128引物：其正向引物如SEQ ID NO.7所示，其反向引物如SEQ ID NO.8所示；

EUCeSSR298引物：其正向引物如SEQ ID NO.9所示，其反向引物如SEQ ID NO.10所示；

EUCeSSR0176引物：其正向引物如SEQ ID NO.11所示，其反向引物如SEQ ID NO.12所示；

EUCeSSR181引物：其正向引物如SEQ ID NO.13所示，其反向引物如SEQ ID NO.14所示；

EUCeSSR304引物：其正向引物如SEQ ID NO.15所示，其反向引物如SEQ ID NO.16所示；

荧光物质加在正向引物的5'端，EUCeSSR0475引物对、EUCeSSR0204引物对、EUCeSSR419引物对、EUCeSSR1128引物对、EUCeSSR298引物对、EUCeSSR0176引物对、EUCeSSR181引物对、EUCeSSR304引物对标记的荧光物质依次分别是ROX、6-FAM、TAMRA、ROX、TAMRA、6-FAM、HEX、ROX；

所述的多重PCR扩增，其反应体系为：2x Type-it Multiplex PCR Master Mix 5 μL，RNase-Free Water 1 μL，Primers 2 μL，30 ng/μL的 Template DNA 2 μL；其中Primers包含的各引物在反应体系中的终浓度为：EUCeSSR0475的正向、反向引物各为0.17 μM，EUCeSSR0204的正向、反向引物各为0.05 μM，EUCeSSR419的正向、反向引物各为0.15 μM，EUCeSSR1128的正向、反向引物各为0.33 μM，EUCeSSR298的正向、反向引物各为0.19 μM，EUCeSSR0176的正向、反向引物各为0.06 μM，EUCeSSR181的正向、反向引物各为0.17 μM，EUCeSSR304的正向、反向引物各为0.87 μM；

所述的多重PCR扩增，其反应程序为：95 ℃预变性 5 min ；95 ℃变性 30s、 60 ℃退火 90s、72 ℃延伸 30 s，30 个循环；60 ℃延伸30 min；20 ℃保温；

c. 对PCR产物进行分型，与桉树无性系STR指纹图谱进行比对，确定待测桉树的品种。