[发明专利]耐热保护剂、猪瘟可室温保存活疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了耐热保护剂，按质量百分含量包括棉子糖1%～5%，麦芽糖5%～10%，蔗糖15%～30%，乳糖1%～5%，葡萄糖1%～5%，聚山梨酯80 0.1%～1.5%，聚乙二醇8000 0.1%～0.5%，酪氨酸0.5%～3%，丝素蛋白3%～6%，其余为注射用水。本发明还公开了耐热保护剂的制备方法。本发明还公开了猪瘟可室温保存活疫苗及其制备方法，将耐热保护剂与猪瘟活病毒液混合后，经过梯度真空干燥得到猪瘟活疫苗。本发明制备的疫苗外观为致密的干燥泡沫状，扫描电镜下呈现出玻璃样片层结构，其玻璃化转变温度高达50℃以上，比常规冻干疫苗高30℃，可在37℃保存3个月，25℃保存一年。

技术领域

本发明属于疫苗制造保存领域，具体涉及耐热保护剂、猪瘟可室温保存活疫苗及其制备方法和应用，尤其涉及一种猪瘟可室温保存活疫苗及其制备方法。

背景技术

猪瘟(classical swine fever，CSF)是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病，流行性广、病死率高，给养猪业造成巨大的安全隐患和经济损失。目前市场上用以预防猪瘟效果较好的是猪瘟细胞活疫苗和猪瘟成兔组织脾淋苗，均是以C株为基础。

猪瘟病毒对热非常敏感，有文献报道，猪瘟病毒在37℃中半衰期仅有3小时；目前常用的猪瘟活疫苗主要采用冷冻干燥工艺制备，市场上常用的冻干保护剂组方简单，大多含有蔗糖、明胶、硫脲、牛血清白蛋白、水解乳蛋白、磷酸盐等成分，疫苗耐热性能有限，仅能在37℃保存7-10天，或-15℃长期保存，或2～8℃保存1-2年，一旦冷链断裂，常温条件下仅几个小时就会使产品效价损失50％以上，甚至完全失效；同时，由于在冷冻过程中形成的冰晶对病毒囊膜或细胞壁造成不同程度的机械性损伤，会大大降低病毒活性。因此，减少疫苗干燥损失、提高疫苗耐热性能以保证疫苗品质，是充分发挥免疫效力的重要关键技术。近年来，很多研究者都在研究、改进耐热工艺，例如喷雾干燥、仿生矿化等，但都处于实验室研究水平。

糖玻璃疫苗技术可以将疫苗制备成玻璃态，该技术主要通过梯度真空干燥工艺得以实现，在真空梯度降低过程中，包含疫苗的高黏度糖通过沸腾、起泡、水分挥发，逐步固相化成为一种玻璃体，由于非还原糖很稳定，因此包裹疫苗的糖玻璃不会与蛋白质产生反应。此技术不需冷冻、在常温中即可进行，避免了传统冻干中“冷冻”产生的冰晶对病毒的机械性损伤，此外，由于疫苗含糖量较高、粘度较大，形成的玻璃态疫苗具有更高的玻璃化转变温度，可以在室温或“冷链”环境以外进行长期保存。

玻璃化转变温度Tg(Glass transition temperature)是物质的重要特性热参数，是物质从玻璃态转变为高弹态的温度。在Tg以下，高聚物处于玻璃态，分子链和链段都不能运动，只是构成分子的原子(或基团)在其平衡位置作振动；而在Tg时分子链虽不能移动，但是链段开始运动，表现出高弹性质，温度再升高，就使整个分子链运动而表现出粘流性质。对于干燥的疫苗而言，Tg越高，Tg与储存温度的差值越大，越有利于疫苗的长期储存。

基于以上原理，在对疫苗进行梯度真空干燥前需要加入增稠剂增加疫苗的黏度，同时真空度下降速率不能太快，以保证在干燥过程中可以起泡且样品不喷瓶。需要注意的是，糖玻璃疫苗的残余水分不能太高，控制在1-3％为宜，在此残水情况下，疫苗可以较好地保持玻璃态且稳定。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种耐热保护剂。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种耐热保护剂的制备方法。

本发明还要解决的技术问题是提供了耐热保护剂在制备疫苗方面的应用。

本发明还要解决的技术问题是提供了耐热保护剂在制备猪瘟可室温保存活疫苗方面的应用。

本发明最后要解决的技术问题是提供了猪瘟可室温保存活疫苗的制备方法。