[发明专利]种牛精液低温保存方法

权利要求书

1.种牛精液低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、精液的采集：采集成熟度好的牛精液，存放于2-4℃无菌的环境下备用；

S2、精液的检测：对步骤S1中的精液进行品质检测；

S3、稀释液的配制：制备出具有冷冻精液功能的稀释液；

S4、精液稀释：步骤S3中的稀释液预热后对步骤S2中品质检测达标的精液进行稀释，所述稀释步骤包括以下子步骤：

A、步骤S3中的稀释液预热到30-37℃后，按稀释液∶精液的体积比为1∶0.5对精液进行第一次稀释，精液第一次稀释后降温至15-20℃并平衡1小时；

B、步骤S3中的稀释液预热到30-37℃后，按稀释液∶精液的体积比为1∶1对步骤A中第一次稀释后的精液进行第二次稀释，精液第二次稀释后降温至5-10℃并平衡1小时，所述第二次稀释的稀释液量基于第一次稀释前的精液量；

C、步骤S3中的稀释液预热到30-37℃后，按稀释液∶精液的体积比为1∶1对步骤B中第二次稀释后的精液进行第三次稀释，精液第二次稀释后降温至2-4℃并平衡1小时，所述第三次稀释的稀释液量基于第一次稀释前的精液量；

S5、冷冻保存：将步骤S4中经三次稀释后的精液用程序化冷冻仪进行冷冻，冷冻结束后抽检并移入液氮罐中进行保存和使用。

2.根据权利要求1所述的种牛精液低温保存方法，其特征在于，步骤S2中品质检测包括以下检测项：精液密度、精子活率、精液酸碱性、精子存活时间。

3.根据权利要求1所述的种牛精液低温保存方法，其特征在于，所述步骤S3中稀释液包括以下组分：超纯水、甘油、大豆卵磷脂、海藻糖、乳糖、维生素E、卵黄、柠檬酸三钠、三羟甲基氨基甲烷、青霉素。

4.根据权利要求1所述的种牛精液低温保存方法，其特征在于，所述步骤A、B、C中稀释液预热到35℃。

5.根据权利要求2所述的种牛精液低温保存方法，其特征在于，步骤S2检测出的精子活率最低标准值为80％。