[发明专利]一种利用色谱-3和动态轴向压缩柱色谱法纯化制备高纯度鹅去氧胆酸的方法

说明书

本发明涉及鹅去氧胆酸的纯化方法，具体涉及一种利用色谱‑3柱色谱和动态轴向压缩柱色谱两步法纯化制备高纯度鹅去氧胆酸的方法。其步骤为：将待纯化处理的低含量的CDCA样品用装填聚苯乙烯/二乙烯基苯型色谱填料的色谱‑3柱色谱分离纯化，获得CDCA粗品，然后将CDCA粗品动态轴向压缩柱色谱分离纯化，获得高纯度CDCA。本发明工艺可纯化15‑20％纯度的鹅去氧胆酸得到70‑80％纯度的CDCA，再经DAC纯化可得到纯度97.5％以上，收率在90％以上，是一种高效、环保、适用性强的工业制备高纯度鹅去氧胆酸的分离纯化方法，可以轻易实现从实验室到工业化鹅去氧胆酸单体的高效分离纯化。

技术领域

本发明涉及鹅去氧胆酸的纯化方法，具体涉及利用色谱-3和动态轴向压缩柱色谱法纯化制备高纯度鹅去氧胆酸的方法。

背景技术

熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid，UDCA)，化学名为3α,7β-二羟基-5β-胆烷-24-酸，是一种具有无毒性的亲水胆酸，具有广泛的治疗作用。目前熊去氧胆酸主要用于治疗固醇性胆结石、原发性硬化性胆管炎、胆源性膜腺炎和胆汁反流性胃炎等疾病，也是用于治疗胆汁淤积性肝病的首选药物，并且可以用于治疗慢性肝炎和肝移植后排斥反应，临床效果良好。熊去氧胆酸是熊类胆汁中特有的胆汁酸成分，结构式如通式⑴所示：

目前获得熊去氧胆酸的方法主要有两种。第一种方法是通过养殖熊，然后通过活体引流的方法取其的胆汁，再经提取分离得到熊去氧胆酸。但该方法的效率不高，时间周期较长，且较大程度上伤害了熊的身体。第二种是通过其他原料合成熊去氧胆酸，如鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸。鹅去氧胆酸(Chenodeoxycholic acid，CDCA)是UDCA的7α差向异构体，化学名为3α,7α-二羟基-5β-胆烷-24-酸。其结构式如通式⑵所示：

文献报道CDCA合成UDCA的路线主要有3种。①以CDCA为原料，经甲酯化、选择性保护羟基、Jones试剂氧化、金属钠和二氯化镍还原得UDCA，总收率42％。②以CDCA为原料，在800℃、选用高专一性复合型Ni-Al₂O₃催化剂、高压、加氢还原制得UDCA，总收率65％。③以7-酮石胆酸为原料，用氢气-Raney镍高压还原或电化学还原得到UDCA，收率大于90％。其中7-酮石胆酸的合成可以CDCA为原料，丙酮和水为介质，经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)氧化制得，收率达89％。

鹅去氧胆酸本身是目前世界上用量最大的治疗胆结石药物之一，同时也是合成熊去氧胆酸和其他甾体化合物的主要医药中间体原料。由于鹅去氧胆酸的来源比较广泛，可以从其他动物的胆中获得，例如鸡胆、鸭胆和猪胆，所以在工业上，通常采用鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸。传统制备CDCA的方法具有普遍性的不足，例如：产品收率较低，纯度不高等。上世纪80年使用的酒精法和盐析法方法落后繁琐，所得产品纯度较低，仅60％左右(商业部动物生物制药学，人民卫生出版社，1980：256)，该方法现基本不采用。CN102827234A公开了利用鸭胆汁提取鹅去氧胆酸的方法，但该方法大量使用乙酸乙酯、污染性大、工艺参数可重复性差；而CN1775798A公开的利用禽类胆汁提取鹅去氧胆酸的方法，由于该方法经皂化之后直接进用大孔树脂进行分离纯化，分离效果差，再进行超滤纯化，增加了该工艺的复杂性，使CDCA损失增多。2012年10月03日中国专利CN102703556A公开了“一种大孔树脂分离鸭胆汁中鹅去氧胆酸的方法”。该工艺分为两步：第一步为微生物溶液制作，第二步为大孔树脂分离鸭胆汁中鹅去氧胆酸。该工艺操作比较复杂，耗时也较长，采用了甲醇等有毒有机溶剂及较多种类的无机试剂。

综上现有技术鹅去氧胆酸的纯化方法主要存在如下不足：1.大量使用有毒有害有机溶剂，污染大，对操作人员造成伤害。2.工艺复杂，可重复性差。3.产品纯度及收率低，达不到市场对鹅去氧胆酸产品高纯度(95％以上)的要求。

发明内容