[发明专利]一种抗肿瘤环肽及其制备方法和医药应用

说明书

一种抗肿瘤环肽及其制备方法和医药应用，属于生物制药领域。抗肿瘤环肽，其氨基酸序列为其中两个Cys形成二硫键，分子量为1442.71。本发明还涉及包含该抗肿瘤环肽的组合物、及其制备方法和医药用途。抗肿瘤活性测试表明，本发明的抗肿瘤环肽对肿瘤细胞如肝癌细胞、宫颈癌细胞和肺癌细胞的增殖抑制效果显著，并具有明显的促凋亡作用。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种抗肿瘤环肽及其制备方法和医药应用。

背景技术

近年来，利用现代生物技术合成的多肽药物已成为药物研发的热点之一，其因适应证广、安全性高且疗效显著，目前已应用于肿瘤等相关重大疾病的预防、诊断和治疗，具有广阔的开发前景。

随着多肽药物成为研发现代药物不可或缺的重要领域之一，其发展也越来越快。目前已经有超过300种多肽药物进入临床试验阶段，有超过600种多肽药物正在临床前试验中，并有超过60种多肽药物上市，包括用于治疗肿瘤的多肽药物，如用于治疗可切除的骨髓瘤的Mepect、用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤的Istodax和用于治疗CD30阳性霍奇金淋巴瘤的Adcetris等。多肽药物分子结构小、易改造、易合成，且生产过程中排放的废物少，属于绿色制药，因此多肽药物是21世纪最有发展前途的药物之一。

发明内容

本发明提供了一种抗肿瘤环肽，所述抗肿瘤环肽的氨基酸序列为其中两个Cys形成二硫键。

该抗肿瘤环肽的分子量为1442.71，可以通过反相高效液相色谱法进行纯化，并且通过该方式纯化可以使其纯度达到96.78％。

本发明提供了一种抗肿瘤组合物，所述抗肿瘤组合物包含本发明所述的抗肿瘤环肽。

本发明进一步公开了所述抗肿瘤环肽的制备方法，所本发明采用固相合成法来制备所述抗肿瘤环肽。所述固相合成法可通过以下措施达到：

采取Fmoc方案，选取CTC高分子树脂，将所述抗肿瘤环肽C端即羧基端的Fmoc-Gly-OH以共价键形式连接到CTC树脂上，脱掉Fmoc保护基团，以结合在高分子树脂上的Gly的氨基作为合成起点，按照所述抗肿瘤环肽从C端即羧基端到N端即氨基端的氨基酸序列CGHFKFGYLRCG的顺序，分别依次进行缩合反应形成肽键，脱Fmoc保护，缩合形成肽键，不断重复循环这个步骤，直到序列全部偶联完全，脱Fmoc保护；之后，用甲醇切割树脂得到多肽粗品，利用反相高效液相色谱法进一步纯化，经过处理使两个Cys形成二硫键成环；再用反相高效液相色谱法纯化得到纯度高达96.78％的目标环肽。

本发明提供了所述抗肿瘤环肽在制备抗肿瘤药物中的应用。所述肿瘤选自肝癌、宫颈癌以及肺癌。所述抗肿瘤环肽在5-500μM浓度范围内对肝癌细胞HepG-2和宫颈癌细胞Hela的增殖抑制率分别为2.6％-100％和3.9％-99.9％，所述抗肿瘤环肽在9-900μM浓度范围内对肺癌细胞A549的增殖抑制率为16.5％-99.3％，其IC₅₀值分别为36.90μM,61.41μM,39.87μM。

本发明提供了所述抗肿瘤环肽在制备用于促进肿瘤细胞凋亡药物中的应用。

在一个实施方案中，所述肿瘤细胞选自肝癌细胞、宫颈癌细胞以及肺癌细胞。

在一个实施方案中，所述肿瘤细胞为肺癌细胞。所述抗肿瘤环肽浓度为40μM时，对肺癌细胞A549的促凋亡率为40.49％。

与现有技术相比，本发明具有以下的优点和技术效果：本发明首次合成了该抗肿瘤环肽，并且采用CCK-8方法测定了该环肽的抗肿瘤活性，所述抗肿瘤环肽具有显著的抑制肿瘤细胞增殖的能力。此外，本发明人还采用流式细胞技术检测了该环肽对肿瘤细胞的促凋亡作用，结果发现，所述抗肿瘤环肽对肿瘤细胞具有显著的促凋亡作用。

附图说明

图1抗肿瘤环肽的HPLC图。