[发明专利]一种酶法制备头孢克洛的方法

说明书

一种酶法制备头孢克洛的方法，包括如下步骤：用7‑氨基‑3‑氯‑头孢烯酸、D‑对苯甘氨酸甲酯盐酸盐、固定化头孢克洛合成酶与头孢克洛晶种制备得到头孢克洛粗粉，将头孢克洛粗粉溶解、脱色后加入头孢克洛晶种调节pH后第一次搅拌养晶，再调节pH后第二次搅拌养晶得到晶体混合液，晶体混合液抽滤得到晶体产物与结晶母液，晶体产物再依次经水洗、泡洗、抽滤、真空干燥后得到头孢克洛。本发明的酶法制备头孢克洛有两次搅拌养晶操作，在重结晶过程中让头孢克洛晶体缓慢的更多的析出，析出晶体的晶体均匀、晶形更好，制备得到的头孢克洛纯度大于99.7%，纯度非常高。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种制备头孢克洛的方法。

背景技术

头孢克洛是一种半合成的第二代口服头孢菌素类抗生素药物，头孢克洛自1979年获FDA批准，1982年在美国成功上市以来，因其具有广谱、高效和良好的临床安全性，它已成为目前治疗细菌感染的重要药物之一。头孢克洛的杀菌机制是使转肤酶失活，干扰细菌细胞壁最终阶段的合成，阻止粘肽原的交联，对葡萄球菌、链球菌属、肺炎球菌及大肠杆菌等革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有很强的杀灭作用。

头孢克洛在工业上的制备方法是采用7-氨基-3-氯-头孢烯酸（7-ACCA）与活化的D-苯甘氨酸通过化学缩合或酶法缩合制备得到。现有技术的化学缩合法，存在工艺复杂、成本高、污染大、溶剂残留高与收率低等问题，传统的酶法也存在纯度不够高等缺点，不利于头孢克洛的扩大生产及广泛应用，在利用酶法制备头孢克洛时如何提高头孢克洛的纯度有待进一步探索研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种酶法制备高纯度头孢克洛的方法，为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种酶法制备头孢克洛的方法，包括如下步骤：

一种酶法制备头孢克洛的方法，包括如下步骤：用7-氨基-3-氯-头孢烯酸、D-对苯甘氨酸甲酯盐酸盐、固定化头孢克洛合成酶与头孢克洛晶种制备得到头孢克洛粗粉，将头孢克洛粗粉溶解、脱色后加入头孢克洛晶种调节pH后第一次搅拌养晶，再调节pH后第二次搅拌养晶得到晶体混合液，晶体混合液抽滤得到晶体产物与结晶母液，晶体产物再依次经水洗、泡洗、抽滤、真空干燥后得到头孢克洛。

上述制备方法中，优选的，所述头孢克洛粗粉溶解时加入盐酸调节pH为0.5-0.7，再加入活性炭脱色，所述活性炭的添加量为7-氨基-3-氯-头孢烯酸质量的3%-5%，加入活性炭脱色的时间为20分钟。

上述制备方法中，优选的，加入头孢克洛晶种之前，保持溶液温度为15℃-20℃，并调节溶液pH为1.0。该温度及pH可让头孢克洛粗粉溶解更加充分，为下步重结晶除杂做准备。

上述制备方法中，优选的，所述第一次搅拌养晶时调节pH为1.5后在5℃-10℃下搅拌养晶30-60min，所述第二次搅拌养晶时缓慢调节pH为4.5后在0℃-5℃下搅拌养晶1-2小时，所述搅拌养晶时保持较低的转速。第一次搅拌养晶时pH为1.5是析晶点，该条件下养晶是为了后续晶体质量、纯度和晶型更好，第二次搅拌养晶时pH为4.5是等电点，此时头孢克洛溶解度最低，可以得到大量晶体，确保收率。两次搅拌养晶操作中pH值及温度的选取可使头孢克洛缓慢析出，保证头孢克洛晶体的晶形更好，纯度更高。

上述制备方法中，优选的，所述头孢克洛晶种的加入质量为7-氨基-3-氯-头孢烯酸质量的0.1%-0.3%，所述晶种为自制的纯度大于99%的头孢克洛晶种，此晶种可避免引入不必要的杂质。

上述制备方法中，优选的，所述头孢克洛粗粉的具体制备步骤如下：